博纳艾杰尔 Agela Technologies

客服热线:400-606-8099
高级搜索
快速订购
最近加入的产品:
购物车里共有有 0 件产品

婴幼儿奶粉中双氰胺的检测 HPLC-UV 法和 LC-MS/MS 法

应用简介

婴幼儿奶粉中双氰胺的检测 HPLC-UV 法和 LC-MS/MS 法——应用编号:AF10045

收藏

(1) 样品:新西兰 婴儿配方奶粉(0~6个月)

(2) 样品提取及净化

称取1g试样于50mL具塞离心管中,加2mL水,涡旋30s,加2mL乙腈涡旋30s。再往现有的提取液中加2mL乙腈,重复上述提取步骤。再将该提取步骤重复2次,得到共计约10mL的提取液。以4000r/min离心5min,将全部上清液加入新一代Cleanert MAS-QuChERS管中(500mg/15mL),将MAS管上下晃动30s,然后涡旋30s后,8000r/min离心5min,取全部上清液(约10mL)于玻璃试管中,50℃下氮气吹干,加入1mL乙腈-水混合溶液(97:3)复溶,过0.22μm滤器,待测。

注:a. 做基质加标实验时的标准溶液建议选择以水为溶剂,防止加标瞬间发生蛋白沉淀;

b.乙腈提取分4次,为防止乙腈体积过多时沉淀蛋白速度过快,影响提取效果;

c. 净化液氮气吹干后,如发现有少量油脂,可采用1mL乙腈:水(97:3)混合溶液复溶,之后加入1mL正己烷(色谱纯)液液萃取,取下层溶液过0.22μm针式过滤器,进样检测。

(3) 检测方法

3.1 高效液相色谱法

色谱柱:Venusil HILIC(5μm,100Å,4.6×250mm);

流动相: 10mmol/L乙酸铵(pH为4.0):乙腈=3:97;

波长:220nm;进样量:10μL;柱温:30℃;

流速:0.8mL/min。

注:本实验选用的奶粉经过净化后,按10mmol/L乙酸铵(pH为4.0):乙腈=15:85液相条件,有一个杂质与双氰胺完全重合,经实验

条件优化后,确定流动相条件为10mmol/L乙酸铵(pH为4.0):乙腈=3:97,双氰胺保留时间为9.3min,可以和杂质完全分离。

3.2 液相色谱串联质谱法

色谱柱:Venusil HILIC(5μm,100Å,2.1×150mm);

流动相:A:0.5mmol/L乙酸铵(pH为4.0) B:乙腈;

进样量:10μL;柱温:30℃;流速:0.3 mL/min。

表2 流动相梯度程序:

时间(min)

A%

B%

0

10

90

0.4

50

50

1.8

50

50

1.9

10

90

7

10

90

*备注:本文曾尝试过多种C18色谱柱,对双氰胺没有保留,需要使用离子对试剂,但是无法用于LC-MS/MS;也曾尝试过MERCK ZIC-HILIC柱,但是得到双氰胺的峰面积偏差较大,分析原因是其具有阳离子交换基团,对双氰胺有不稳定的死吸附。最后确定使用键合丙基酰胺的Venusil HILIC柱,以亲水作用色谱机理对双氰胺进行保留。

质谱条件:

质谱仪:API 4000+;离子源:电喷雾离子源;扫描方式:正离子扫描;检测方式:多反应监测;CAD:8.00;

CUR:20.00;GS1:60.00;GS2:50.00;IS:5500.00;

TEM:600.00。

表3 双氰胺质谱信息:

药物名称

监测离子对

DP

EP

CE

CXP

双氰胺

85.1/68.1

71

10

41

6


85.1/43.1

71

10

41

6

4. 结果与讨论

4.1 高效液相色谱法

图3 双氰胺10μg/mL标准溶液的液相色谱图:

实际样品基质加标的线性关系和检出限

准确称取双氰胺标准品50mg于50mL容量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,作为标准贮备液;

分别称取1g奶粉试样,添加一定量标准溶液,配制成含双氰胺为0.5μg/g,1μg/g,2μg/g,5.0μg/mL和10μg/g的添加样品,按照上述提取、净化方法操作,所得净化液按照上述色谱条件,依次进样检测。以双氰胺含量为横坐标,峰面积为纵坐标,拟合线性方程,结果见表4:

表4 双氰胺线性方程和定量限(HPLC法):

名称

保留时间

线性方程

相关系数

最低定量限(S/N=10)

双氰胺

5.57min

Y=108.16X+27.827

0.9971

0.5μg/g

准确度和精密度

选取市售某品牌婴幼儿奶粉试样,进行添加回收实验,结果见表5

表5 0.5μg/g添加回收实验结果(HPLC法):

平行1

平行2

平行3

平均值

RSD

82.30%

85.50%

89.10%

85.63%

3.97%

图4 奶粉0.5μg/g添加谱图:

图5 奶粉空白谱图:

4.2 LC-MS/MS法:

图6 双氰胺10ng/mL标准溶液质谱图:

实际样品基质加标的线性关系和检出限

准确称取双氰胺标准品50mg于50mL容量瓶中,加水溶液并稀释至刻度,作为标准贮备液;

分别称取1g奶粉试样,添加一定量标准溶液,配制成含双氰胺为5ng/mL,10ng/mL,50ng/mL,100ng/mL和200ng/mL的添加样品,按照上述提取、净化方法操作,所得净化液按照上述液质条件,依次进样检测。以双氰胺含量为横坐标,峰面积为纵坐标,拟合线性方程,结果见表6:

表6 双氰胺线性方程和定量限(LC-MS/MS法):

名称

保留时间

线性方程

相关系数

最低定量限(S/N=10)

双氰胺

3.15min

Y=3859.1X+23694

0.99

2ng/g

准确度和精密度

选取市售某婴幼儿奶粉试样,进行添加回收实验,结果见表7。采用空白样品稀释法判断检测方法的基质效应影响。空白净化液稀释和乙腈稀释的标准溶液,双氰胺峰面积和相对丰度比无明显变化,故判断该方法无基质效应的影响。

表7 10ng/g添加回收实验结果:

平行1

平行2

平行3

平均值

RSD

82.50%

83.50%

89.30%

85.20%

4.31%

图 7 婴幼儿奶粉空白质谱图:

图 8 婴幼儿奶粉10ng/g 添加水平的质谱图:

(4) 订货信息

产品名称

规格包装

订货

新一代MAS-QuChERS-双氰胺净化管(填料量加大,更适合婴幼儿奶粉等复杂样品)

500mg/15mL,50支/包

MS-SQA02

MAS-QuChERS-双氰胺净化管

100mg/2mL,50支/包

MS-SQA01

Venusil®HILIC

4.6×250mm,5μm,100Å

VH952505-0

液相色谱柱

2.1×150mm,5μm,100Å

VH951502-0

针式过滤器(Nylon)

0.22μm,直径13mm, 200/pk

AS021320

一次性注射器,无针头

5mL,100/pk

ZSQ-5ML

双氰胺对照品

500mg /瓶,含量≥99.0%

DCD-0001


1g/瓶,含量≥99.0%

DCD-0002

离心管

50mL,带螺纹盖,25个/包

LXG0050

1.5mL样品瓶

短螺纹透明带书写32×11.6mm,   100/pk

1109-0519

1.5mL样品瓶盖

9   mm中心孔蓝盖,红色橡胶/米色PTFE隔垫,45.Shore A 1.0mm,100/pk

0915-1819

乙腈

4×4L/箱

AH015-4

应用编号:AF10045

  • Venusil HILIC

    Venusil HILIC 色谱柱,键合相为中性的酰胺基团。在处理强极性化合物方面,Venusil HILIC 色谱柱比反相C18 色谱柱表现出更大的优势,利用亲水作用色谱原理,可保留或分离强极性、水溶性碱性有机化合物。

  • 尼龙(Nylon通用)

    广泛的化学相容性(避强酸),良好的柔韧性 ,与大多数试剂相容,低蛋白吸附。 应用于电子、微电子、半导体工业水过滤;药液、饮料、高纯化学品的过滤

  • HPLC 过滤专用一次性注射器

    专业医用注射器厂家生产;节约成本;无需按医疗废弃物处理。

  • ND9(广口)

    广口短螺纹样品瓶 适配:Agilent Thermo Scientific Varian Waters etc.

  • Burdick&Jackson溶剂

    Burdick&Jackson 是美国Honeywell( 霍尼韦尔) 跨国公司下属专门生产溶剂系列的生产商,为全美溶剂市场占有率最大的公司。B&J 提供46 种不同品种和规格的溶剂,可满足气相、液相、分光光度、农药残留分析,有机合成等方面的应用。作为高纯溶剂生产商,B&J 以ISO9001 作为质量保证体系,并且可满足GMP 用户的要求。

产品数量修改成功!
总价为:

关闭

登录

X
Email
密码
注册找回密码