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(GB 5009.84-2016) 婴幼儿配方奶粉中维生素B1 的测定

应用简介

摘要:本实验以GB 5009.84-2016第一法为依据,用Venusil XBP C18(2)色谱柱对婴幼儿配方奶粉中的维生素B1进行了测试。样品在稀盐酸介质中恒温水解、中和再酶解,水解液用碱性铁氰化钾溶液衍生,正丁醇萃取后,经Venusil XBP C18(2)色谱柱分离,高效液相-荧光检测器检测,外标法进行定量。结果表明,Venusil XBP C18(2)(5 µm,100 Å,4.6 × 250 mm)检测维生素B1保留时间稳定且峰形良好,能够满足检测要求。

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前言

维生素B1又称硫胺素或抗神经炎维生素或抗脚气病维生素,由嘧啶环和噻唑环通过亚甲基结合而成的一种B族维生素。维生素B1主要存在于种子的外皮和胚芽中,如米糠和麸皮中含量很丰富,在酵母菌中含量也极丰富。瘦肉、白菜和芹菜中含量也较丰富。所用的维生素B1都是化学合成的产品。在体内,维生素B1以辅酶形式参与糖的分解代谢,有保护神经系统的作用;还能促进肠胃蠕动,增加食欲。维生素B1缺乏时,可引起多种神经炎症,如脚气病。维生素B1缺乏所引起的多发性神经炎,患者的周围神经末梢有发炎和退化现象,并伴有四肢麻木、肌肉萎缩、心力衰竭、下肢水肿等症状。在现代医学上,维生素B1制剂治疗脚气病和多种神经炎症有显著疗效。

实验部分

仪器、试剂与材料

主要仪器设备

高效液相色谱仪-荧光检测器

试剂材料

正丁醇、铁氰化钾、氢氧化钠、盐酸、乙酸钠、氯化钙均为分析纯;

冰乙酸、甲醇为色谱纯

维生素B1标准品(纯度99%):盐酸硫胺素,CAS 67-03-8;

木瓜蛋白酶:应不含维生素B1,酶活力≥800 U(活力单位)/mg;

淀粉酶:应不含维生素B1,酶活力≥3700 U/g;

20 g/L铁氰化钾溶液:称取2 g铁氰化钾,用水溶解并定容至100 mL,摇匀;

100 g/L氢氧化钠溶液:称取25 g氢氧化钠,用水溶解并定容至250 mL,摇匀;

碱性铁氰化钾溶液:将5 mL上述铁氰化钾溶液与200 mL上述氢氧化钠溶液混合,摇匀;

0.1 mol/L盐酸溶液:移取8.5 mL盐酸,加水稀释至1000 mL,摇匀;

0.01 mol/L盐酸溶液:量取0.1 mol/L盐酸溶液50 mL,用水稀释并定容至500 mL,摇匀;

0.05 mol/L乙酸钠溶液:称取6.08 g乙酸钠,加900 mL水溶解,用冰乙酸调节pH为4.0 ~ 5.0之间,加水定容至1000 mL,经0.45 µm微孔滤膜过滤后使用;

2.0 mol/L乙酸钠溶液:称取27.2 g乙酸钠,用水溶解并定容至100 mL,摇匀;

混合酶溶液:称取1.76 g木瓜蛋白酶、1.27 g淀粉酶,加水定容至50 mL,涡旋,使呈混悬状液体,冷藏保存。

样品制备

样品提取

称取3 g ~ 5 g固体试样或者10 g ~ 20 g液体试样于100 mL锥形瓶中(带有软质塞子),加60 mL 0.1 mol/L盐酸溶液,充分摇匀,塞上软质塞子,高压灭菌锅中121℃保持30 min。水解结束待冷却至40℃取出,轻摇数次,用2.0 mol/L乙酸钠溶液调节pH至4.0左右,加入2 mL(可根据酶活力不同适当调整用量)混合酶溶液,摇匀后,置于培养箱中37℃过夜(约16 h),将酶解液全部转移至100 mL容量瓶中,用水定容至刻度,摇匀,离心或者过滤,取上清液备用。

样品衍生化

准确移取上述上清液或者滤液2 mL于10 mL试管中,加入1 mL碱性铁氰化钾溶液,涡旋混匀后,准确加入2 mL正丁醇,再次涡旋混匀1.5 min后静置约10 min或者离心,待充分分层后,吸取正丁醇相(上层)经0.45 µm微孔滤膜过滤,取滤液于2 mL棕色进样瓶中,待检测。若样品中维生素B1浓度超出线性范围的最高浓度值,应取上清液稀释适宜倍数后,重新衍生后进样。

实验条件

液相条件

色谱柱:Venusil® XBP C18(2)  5 µm, 4.6 × 250 mm,100 Å

流动相:0.05 mol/L乙酸钠溶液︰甲醇 = 65︰35

荧光检测器检测波长:激发波长375 nm,发射波长435 nm

流速:1.0 mL/min;进样量:10 μL

结果与讨论

实验结果

经图1、图2可知,采用Venusil XBP C18(2)色谱柱检测婴幼儿配方奶粉中的维生素B1,峰形良好,保留时间稳定,能够满足实验要求。

图1 维生素B1标准溶液

图2 婴幼儿配方奶粉中的维生素B1

结论

本实验依据GB 5009.84-2016第一法,用Venusil XBP C18(2)(5 µm,100 Å,4.6 × 250 mm)检测婴幼儿配方奶粉中的维生素B1,并结合液相色谱-荧光检测器对样品进行了检测,结果维生素B1保留时间稳定,峰形良好,说明Venusil XBP C18(2)(5 µm,100 Å,4.6 × 250 mm)能够用于婴幼儿配方奶粉中维生素B1的检测。

注意事项

按照国标法进行样品前处理时回收率较低,可采用先热超声提取,再经过酸沉淀蛋白后直接衍生化的方法加以改善。热超声时要注意温度的控制,以防止维生素B1遭到破坏。

因维生素B1为强极性化合物实验中应注意流动相比例的确定,且流动相的pH对出峰时间影响较大,因此在每次开始实验前,要调节流动相pH 值到相同的值。

附:相关产品

产品名称

规格描述

包装数量

订货号

Venusil XBP   C18(2)

4.6 × 250 mm, 5µm, 100 Å

1支

VX952505-2

1.5 mL样品瓶

短螺纹透明带书写处

32 × 11.6 mm

100/pk

1109-0519

1.5mL样品瓶盖

9 mm中心孔蓝盖,红色橡胶/米色PTFE隔垫

45°Shore A; 1.0 mm

100/pk

0915-1819

微孔滤膜

尼龙,50 mm,0.45 µm

100片

AM025045

应用编号:AF10010


  • Venusil XBP

    Venusil® XBP C18 采用特殊的键合工艺,双封尾,键合密度大,碳含量高,疏水性较高( 极性低),适用于各类非极性化合物分析,在酸或碱性流动相下都有很好的分离效果。

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