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(GB 5009.85-2016) 婴幼儿配方奶粉中维生素B2 的测定

应用简介

摘要:本实验以GB 5009.85-2016第一法为依据,用Venusil XBP C18(2)色谱柱对婴幼儿配方奶粉中的维生素B2进行了测试。样品在稀盐酸介质中恒温水解、中和再酶解,经Venusil XBP C18(2)色谱柱分离,高效液相-荧光检测器检测,外标法进行定量。结果表明,Venusil XBP C18(2)(5 µm,100 Å,4.6 × 150 mm)检测维生素B2保留时间稳定且峰形良好,能够满足检测要求。

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前言

维生素B2又叫核黄素,为体内黄酶类辅基的组成部分(黄酶在生物氧化还原中发挥递氢作用),当缺乏时,就影响机体的生物氧化,使代谢发生障碍。其病变多表现为口、眼和外生殖器部位的炎症,如口角炎、唇炎、舌炎、眼结膜炎和阴囊炎等,故本品可用于上述疾病的防治。体内维生素B2的储存是很有限的,因此每天都要由饮食提供。维生素B2是水溶性维生素,容易消化和吸收,被排出的量随体内的需要以及可能随蛋白质的流失程度而有所增减;它不会蓄积在体内,所以时常要以食物或营养补品来补充。广泛存在于酵母、肝、肾、蛋、奶、大豆等中。

实验部分

仪器、试剂与材料

主要仪器设备

高效液相色谱仪-荧光检测器

试剂材料

冰乙酸、甲醇、盐酸均为色谱纯;

氢氧化钠、三水合乙酸钠为分析纯;

维生素B2标准品(纯度98%);

木瓜蛋白酶:酶活力≥10 U/mg;

高峰淀粉酶:酶活力≥100 U/mg;

1 mol/L氢氧化钠溶液:称取4 g氢氧化钠,加90 mL水溶解,冷却后定容至100 mL;

0.1 mol/L盐酸溶液:移取8.5 mL盐酸,加水稀释至1000 mL,摇匀;

0.05 mol/L乙酸钠溶液:称取6.08 g乙酸钠,加900 mL水溶解,用冰乙酸调节pH为4.0 ~ 5.0之间,加水定容至1000 mL;

0.1 mol/L乙酸钠溶液:称取13.60 g乙酸钠,用水溶解并定容至1000 mL;

混合酶溶液:称取2.345 g木瓜蛋白酶、1.175 g高峰淀粉酶,加水溶解后定容至50 mL。

样品制备

称取2 ~ 10 g混匀后的试样(试样中的维生素B2的含量大于5 µg)于100 mL具塞锥形瓶中,加入60 mL的0.1 mol/L盐酸溶液,充分摇匀,塞好瓶塞。将锥形瓶放入高压灭菌锅内,在121℃下保持30 min,冷却至室温后取出。用1 mol/L氢氧化钠溶液调节pH至6.0 ~ 6.5,加入2 mL混合酶溶液,摇匀后置于37℃培养箱或者恒温水浴锅中过夜酶解。将酶解液转移至100 mL容量瓶中,加水定容至刻度,用滤纸过滤或离心,取滤液或上清液,过0.45 µm水相滤膜作为待测液。

实验条件

液相条件

色谱柱:Venusil®XBP C18(2)  5 µm,4.6 × 150mm,100 Å

流动相:0.05 mol/L乙酸钠溶液︰甲醇 = 65︰35

荧光检测器检测波长:激发波长462 nm,发射波长522 nm

流速:1.0 mL/min;进样量:10 μL。

结果与讨论

实验结果

经图1、图2可知,采用Venusil XBP C18(2)色谱柱检测婴幼儿配方奶粉中的维生素B2,峰形良好,保留时间稳定,能够满足实验要求。

图1 维生素B2标准溶液

图2 婴幼儿配方奶粉中的维生素B2

结论

本实验依据GB 5009.85-2016第一法,用Venusil XBP C18(2)(5 µm,100 Å,4.6 × 150 mm)检测婴幼儿配方奶粉中的维生素B2,并结合液相色谱-荧光检测器对样品进行了检测,结果维生素B2保留时间稳定,峰形良好,而且试样中杂质与维生素B2分离度良好,说明Venusil XBP C18(2)(5 µm,100 Å,4.6 × 150 mm)色谱柱能够用于婴幼儿配方奶粉中维生素B2的检测。

注意事项

可以在避光的条件下,用直接酸解法除去样品中的蛋白质。这种方法操作比较简单,耗时短,成本也比较低。

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产品名称

规格描述

包装数量

订货号

Venusil XBP   C18(2)

4.6 × 150 mm, 5   µm, 100 Å

1支

VX951505-2

1.5 mL样品瓶

短螺纹透明带书写处

32 × 11.6 mm

100/pk

1109-0519

1.5mL样品瓶盖

9 mm中心孔蓝盖,红色橡胶/米色PTFE隔垫

45°Shore A; 1.0 mm

100/pk

0915-1819

微孔滤膜

水系,50 mm,0.45 µm

100片

AM015045

应用编号:AF10011

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