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(GB 5009.169-2016) 婴幼儿配方奶粉中牛磺酸的测定

应用简介

(GB 5009.169-2016) 婴幼儿配方奶粉中牛磺酸的测定——应用编号:AF10016

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前言

牛磺酸(Taurine)又称β-氨基乙磺酸,最早由牛黄中分离出来,故得名。牛磺酸在体内以游离状态存在,不参与体内蛋白的生物合成。牛磺酸虽然不参与蛋白质合成,但它却与胱氨酸、半胱氨酸的代谢密切相关。人体合成牛磺酸的半胱氨酸亚硫酸羧酶(CSAD)活性较低,主要依靠摄取食物中的牛磺酸来满足机体需要。牛磺酸在脑内的含量丰富、分布广泛,能明显促进神经系统的生长发育和细胞增殖、分化,且呈剂量 依赖性,在脑神经细胞发育过程中起重要作用。研究表明:早产儿脑中的牛磺酸含量明显低于足月儿,这是因为早产儿体内的半胱氨酸亚磺酸脱氢酶(CSAD)尚未发育成熟,合成牛磺酸不足以满足机体的需要,需由母乳补充。母乳中的牛磺酸含量较高,尤其初乳中含量更高。如果补充不足,将会使幼儿生长发育缓慢、智力发育迟缓。

实验部分

仪器、试剂与材料

主要仪器设备

高效液相色谱仪-紫外检测器

试剂材料

乙腈、盐酸、冰乙酸、丹磺酰氯(5-二甲氨基萘-1-磺酰氯)均为色谱纯;

无水碳酸钠、乙酸钠、盐酸甲胺(甲胺盐酸盐)为分析纯;

牛磺酸标准品(纯度99%);

1 mol/L盐酸溶液:吸取9 mL盐酸,用水稀释并定容至100 mL;

80 mmol/L碳酸钠缓冲液:称取0.424 g无水碳酸钠,加40 mL水溶解,用1 mol/L盐酸溶液调节pH至9.5,用水定容至50 mL;

丹磺酰氯溶液:称取0.15 g丹磺酰氯,用乙腈溶解并定容至100 mL;

盐酸甲胺溶液:称取2 g盐酸甲胺,用水溶解并定容至100 mL;

10 mmol/L乙酸钠缓冲液:称取0.82 g乙酸钠,加800 mL水溶解,用冰乙酸调节pH至4.2,用水定容至1000 mL,经0.45 µm微孔滤膜过滤;

沉淀剂1:称取15 g亚铁氰化钾,用水溶解并定容至100 mL;

沉淀剂2:称取30 g乙酸锌,用水溶解并定容至100 mL。

样品制备

样品提取

称取5 ~ 40 g试样于锥形瓶中,加入40℃温水20 mL,充分混匀,超声提取10 min,冷却到室温。加1 mL沉淀剂1,涡旋混合,1 mL沉淀剂2,涡旋混合,转入100 mL容量瓶中,用水定容至刻度,充分混匀,样液于5000 r/min离心10 min,取上清液备用。上清液在4℃暗处保存放置24 h内稳定。

样品衍生化

准确吸取1 mL上述上清液到10 mL具塞玻璃试管中,加入1 mL碳酸铵缓冲液,1 mL丹磺酰氯溶液,充分混合,室温避光衍生反应(1 h后需摇晃1次),加入0.1 mL盐酸甲胺溶液涡旋混合,以终止反应,避光静置至沉淀完全。取上清液经0.45 µm微孔滤膜过滤,取滤液备用。衍生物在4℃下可避光保存48 h。

实验条件

液相条件

液相色谱柱:Venusil® XBP C18(2)  5 µm,4.6 × 250 mm, 100 Å;

流动相:10 mM乙酸钠缓冲溶液(pH为4.2)︰乙腈=70︰30(V/V);

波长:254 nm; 流速:1.0 mL/min; 进样量:20 µL。

结果与讨论

实验结果

经图1、图2可知,采用Venusil XBP C18(2)色谱柱检测婴幼儿配方奶粉中的牛磺酸,峰形良好,保留时间稳定,且与杂质的分离度良好,能够满足检测要求。

图1 牛磺酸标准品

图2 婴幼儿配方奶粉中的牛磺酸

结论

本实验依据GB 5009.169-2016第二法,用Venusil XBP C18(2)(5 µm,100 Å,4.6 × 250 mm)检测婴幼儿配方奶粉中的牛磺酸,并结合液相色谱-紫外检测器对样品进行了检测,结果牛磺酸保留时间稳定,峰形良好,且与样品中杂质分离效果较好,说明Venusil XBP C18(2)(5 µm,100 Å,4.6 × 250 mm)能够用于婴幼儿配方奶粉中牛磺酸的检测。

注意事项

牛磺酸试液及标准工作液在衍生过程中要注意避光。

流速对分离效果及保留时间影响较大,具体的实验中应注意对流速的选择。

附:相关产品

产品名称

规格描述

包装数量

订货号

Venusil XBP   C18(2)

4.6 × 250 mm, 5   µm, 100 Å

1支

VX952505-2

1.5 mL样品瓶

短螺纹透明带书写处

32 × 11.6 mm

100/pk

1109-0519

1.5mL样品瓶盖

9 mm中心孔蓝盖,红色橡胶/米色PTFE隔垫

45°Shore A; 1.0 mm

100/pk

0915-1819

微孔滤膜

尼龙,50 mm,0.45 µm

100片

AM025045

应用编号:AF10016

  • Venusil XBP

    Venusil® XBP C18 采用特殊的键合工艺,双封尾,键合密度大,碳含量高,疏水性较高( 极性低),适用于各类非极性化合物分析,在酸或碱性流动相下都有很好的分离效果。

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