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《中国药典》2015 年版盐酸水苏碱采用的亲水色谱柱(中国药典2015)

应用简介

应用编号:AP0041,《中国药典》2015 年版盐酸水苏碱采用的亲水色谱柱(中国药典2015)

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专用柱信息

Venusil stachydrine盐酸水苏碱专用色谱柱专为分析益母草中盐酸水苏碱而设计。该产品是以硅胶为基质,键合相由于采用了中性的酰胺基团,在亲水作用色谱模式下对强极性、水溶性碱性有机化合物有很好的选择性。

HILIC是一种亲水作用色谱模式,其洗脱是以化合物亲水性/极性增加的次序排列,提高流动相中有机相的比例会增加溶质的保留,典型的流动相是乙腈(40%--97%)/水(或挥发性缓冲盐),同时它可以使用更高挥发性的流动相或缓冲盐,方便了与质谱检测器和蒸发光检测器的联用。

盐酸水苏碱测试方法和分析图谱

参照2015版中国药典一部益母草含量测定项下的色谱条件:

以丙基酰胺键合硅胶为填充剂,以乙腈-0.2%冰醋酸溶液(80:20)为流动相,蒸发光散射检测器检测。要求理论塔板数以盐酸水苏碱计算应不低于6000。

色谱柱:Venusil stachdrine;5μm,4.6*250mm

订货号:VH952505-LH

流动相:乙腈︰0.2%冰醋酸溶液=80︰20(v/v)

流  速:0.5 mL/min

柱  温:20℃

检测器:ELSD(蒸发光散射检测器)

进样量:10μL

ssdsdsdsd.jpg

保留时间/min

理论塔板数

拖尾因子

17.888

15203

1.06

安装

1、拆开柱包装盒,确认色谱柱的类型、规格。

2、拧下柱两端的密封堵头放回包装盒备用。

3、按柱管上标示的流动相流向,使用PEEK头及PEEK管或不锈钢管件将色谱柱连接到检测仪器。

4、使用小内径的连接管件,分析柱一般使用内径为0.25 mm (0.010") 的管路,和缩短连接管路的长度,从而减少死体积。

使用和维护

防护

在连接和使用色谱柱时要注意安全,佩戴手套、口罩和防护镜,任何原因(管路连接不紧、管路老化、PEEK头老化)导致的溶剂和样品泄露直接接触到操作人员,都会对操作人员的健康产生影响。

使用方向

色谱柱在使用过程中要保持流动相方向和色谱柱标示的箭头方向一致,如无特殊情况,不建议反向使用(如为清洗色谱柱前柱头的污染物时,可考虑低流速反向冲洗)

活化

新的盐酸水苏碱专用柱出厂时柱体中的液相为乙腈,在储存和运输过程中柱体可能会出现短暂干涸,故新柱第一次使用前需使用大于20倍柱体积的乙腈以0.5mL/min的流速进行活化后再选择实验所需的操作条件进行平衡,如果实验所需的流动相中含缓冲液,需使用与流动相等比例的有机相和水进行过渡,避免出现盐析现象。

样品前处理

为了避免样品或流动相中的微粒杂质对色谱柱前筛板造成堵塞,实验所用的所有试剂和样品在使用前都应使用0.45μm或0.22μm的微孔滤膜进行过滤。对于基质较复杂的样品,推荐使用SPE固相萃取系统进行前处理。

流动相和样品pH

为了使色谱柱获得更佳的寿命和效果,请遵循厂家建议的pH范围内使用,盐酸水苏碱专用柱pH最佳适用范围为2.0-6.0,pH过高会使硅胶溶解,pH过低会导致部分或全部的键合相脱落,出现柱性能下降,造成实验结果不重现。

流动相和样品溶剂

应避免流动相在高有机相体系下使用与有机相不互溶的磷酸盐或其他缓冲盐,避免由于盐析损坏色谱柱。为不干扰HILIC分离机制,不要使用三氟乙酸和其他离子对试剂。如果可能,请尽量选择流动相溶解样品,不要使用水或DMSO溶解样品,避免出现溶剂效应导致的峰型变差。

柱温和压力

最高操作温度应低于60℃,长期在高温下使用(>60℃)会损坏色谱柱,这种情况在Ph>6.0时表现最为明显。色谱柱可承受400Bar的压力,但长期处于高压状态会影响色谱柱的性能和使用寿命,正常操作使用时建议柱压应低于200Bar。

保护柱

在进行基质较复杂的样品分析时,为使色谱柱获得更好的寿命,建议在色谱柱前使用保护柱,阻挡系统中的微粒和延缓样品对固定相的化学污染。

冲洗程序

色谱柱使用完毕后需依次使用50%乙腈、5%乙腈、100%乙腈以0.5mL/min冲洗至少20倍柱体积,如果柱前有连接保护柱,需与色谱柱断开分别进行冲洗。

储存

储存色谱柱时,不要有水或缓冲液留在色谱柱中,可使用乙腈作为色谱柱的封存溶剂。长期不用的色谱柱为了防止柱床干涸,建议定期对色谱柱进行冲洗,冲洗完毕用堵头塞紧色谱柱的两

  • Venusil HILIC

    Venusil HILIC 色谱柱,键合相为中性的酰胺基团。在处理强极性化合物方面,Venusil HILIC 色谱柱比反相C18 色谱柱表现出更大的优势,利用亲水作用色谱原理,可保留或分离强极性、水溶性碱性有机化合物。

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