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婴幼儿奶粉中双氰胺的分析方法

应用简介

婴幼儿奶粉中双氰胺的分析方法——应用编号AF10045

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北京时间1月25日凌晨消息,新西兰牛奶中发现了有害物质——双氰胺。双氰胺又名二氰二胺,缩写DICY或DCD。虽然国际标准未对食品中的双氰胺限量,但高剂量的双氰胺对人体是有毒的。

针对婴幼儿奶粉中基质复杂的特点,本方法加大了净化材料的用量,以获得了更好的净化效果。采用天津博纳艾杰尔科技的新一代的Cleanert® MAS-QuChERS-双氰胺净化管(500 mg/15 mL,货号:MS-SQA02)和Venusil® HILIC液相色谱柱,建立了奶粉中双氰胺的MAS-QuEChERS快速前处理方法和LC-UV以及LC-MS/MS检测方法。

1 实验部分

1.1 仪器、试剂与材料

高效液相色谱仪,涡旋振荡器,超声波清洗机,氮吹仪。

双氰胺标准品(CAS: 461-58-5;FW=84.08),新一代Cleanert® MAS-QuChERS-双氰胺净化管,Venusil® HILIC液相色谱柱,微孔滤膜,乙酸铵、乙酸、乙腈为色谱纯,实验用水为超纯水。

样品:新西兰婴儿配方奶粉(0~6个月)

表1 双氰胺的信息

名称

结构式

分子量

CAS

双氰胺

84.08

461-58-5

1.2 实验步骤

称取1 g试样于50 mL具塞离心管中,加2 mL水,涡旋30 s,加2 mL乙腈涡旋30 s。再往现有的提取液中加2 mL 乙腈,重复上述提取步骤。再将该提取步骤重复2次,得到共计约10 mL 的提取液。以4000 r/min 离心5 min,将全部上清液加入新一代Cleanert® MAS-QuChERS 管中(500 mg/15 mL),将MAS 管上下晃动30 s,然后涡旋30 s 后,8000 r/min 离心5 min,取全部上清液(约10 mL)于玻璃试管中,50℃下氮气吹干,加入1 mL 乙腈-水混合溶液(97:3)复溶,过0.22 μm 微孔滤膜,待测。

注:1.做基质加标实验时的标准溶液建议选择以水为溶剂,防止加标瞬间发生蛋白沉淀;

2.乙腈提取分4 次,为防止乙腈体积过多时沉淀蛋白速度过快,影响提取效果;

3.净化液氮气吹干后,如发现有少量油脂,可采用1 mL 乙腈:水(97:3)混合溶液复溶,之后加入1 mL 正己烷(色谱纯)液液萃取,取下层溶液过0.22 μm 微孔滤膜,进样检测。

1.3 实验条件

1.3.1 高效液相色谱法(HPLC 法):

色谱柱:Venusil® HILIC(5 μm,100 Å,4.6 × 250mm);

流动相: 10 mmol/L 乙酸铵(pH=4.0):乙腈=15: 85;

波长:220 nm;进样量:10 μL;柱温:30℃;流速:0.8 mL/min。

1.3.2 LC-MS/MS 法:

(1)色谱条件:

色谱柱:Venusil® HILIC( 5 μm,100 Å,2.1 × 150mm);

流动相:A:0.5 mmol/L 乙酸铵(pH=4.0)

B:乙腈;

进样量:10 μL;柱温:30℃;流速:0.3 mL/min。

表 2 流动相梯度程序

时间,min

A%

B%

0

10

90

0.4

50

50

1.8

50

50

1.9

10

90

7

10

90

*备注:本文曾尝试过多种C18 色谱柱,对双氰胺没有保留,需要使用离子对试剂,但是无法用于LC-MS/MS;也曾尝试过MERCK ZIC-HILIC 柱,但是得到双氰胺的峰面积偏差较大,分析原因是其具有阳离子交换基团,对双氰胺有不稳定的死吸附。最后确定使用键合丙基酰胺的Venusil HILIC 柱,以亲水作用色谱机理对双氰胺进行保留。

(2)质谱条件:

质谱仪:AB SCIEX API 4000+;离子源:电喷雾离子源;扫描方式:正离子扫描;检

测方式:多反应监测;CAD:8.00;CUR:20.00;GS1:60.00;GS2:50.00;IS:5500.00;

TEM:600.00。

表 3 双氰胺质谱信息

药物名称

监测离子对

DP

EP

CE

CXP

双氰胺

85.1/68.1

71

10

41

6


85.1/43.1

71

10

41

6

注:带“____”的监测离子对为定量离子对。

2 结果与讨论

2.1 高效液相色谱法:

2.1.1 双氰胺的液相色谱图

2.1.2 实际样品基质加标的线性关系和检出限

准确称取双氰胺标准品 50mg 于50mL 容量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,作为标

准贮备液;

分别称取 1g 奶粉试样,添加一定量标准溶液,配制成含双氰胺为0.5μg/g,1μg/g,2μg/g,5.0μg/mL 和10μg/g 的添加样品,按照上述提取、净化方法操作,所得净化液按照上述色谱条件,依次进样检测。以双氰胺含量为横坐标,峰面积为纵坐标,拟合线性

方程,结果见表4:

表 4 双氰胺线性方程和定量限(HPLC 法)

名称

保留时间

线性方程

相关系数

最低定量限(S/N=10

双氰胺

5.57min

Y=108.16X+27.827

0.9971

0.5µg/g

2.1.3 准确度和精密度

选取市售某品牌婴幼儿奶粉试样,进行添加回收实验,结果见表5

表 5 0.5μg/g 添加回收实验结果(HPLC 法)

平行1

平行2

平行3

平均值

RSD

82.3%

85.5%

89.1%

85.63%

3.97%

2.2 LC-MS/MS法

2.2.1双氰胺的LC-MS/MS图

图4 双氰胺10 ng/mL标准溶液质谱图

2.2.2实际样品基质加标的线性关系和检出限准确称取双氰胺标准品50 mg于50 mL容量瓶中,加水溶液并稀释至刻度,作为标准贮备液; 分别称取1 g奶粉试样,添加一定量标准溶液,配制成含双氰胺为5 ng/mL,10 ng/mL,50 ng/mL,100 ng/mL和200 ng/mL的添加样品,按照上述提取、净化方法操作,所得净化液按照上述液质条件,依次进样检测。以双氰胺含量为横坐标,峰面积为纵坐标,拟合线性方程,结果见表6:

表6 双氰胺线性方程和定量限(LC-MS/MS法)

名称

保留时间

线性方程

相关系数

最低定量限(S/N=10

双氰胺

3.15min

Y=3859.1X+23694

0.9900

2ng/g

2.2.3准确度和精密度选取市售某婴幼儿奶粉试样,进行添加回收实验,结果见表7。采用空白样品稀释法判断检测方法的基质效应影响。空白净化液稀释和乙腈稀释的标准溶液,双氰胺峰面积和相对丰度比无明显变化,故判断该方法无基质效应的影响。

表7 10 ng/g添加回收实验结果

平行1

平行2

平行3

平均值

RSD

82.5%

83.5%

89.3%

85.2%

4.31%

图 7 婴幼儿奶粉空白质谱图

3.订货指南

产品名称

规格型号

货号

新一代

MAS-QuChERS-双氰胺净化管(填料量加大,更适合婴幼儿奶粉等复杂样品)

500 mg/15 mL50/

MS-SQA02

MAS-QuChERS-双氰胺净化管

100 mg/2 mL50/

MS-SQA01

Venusil HILIC液相色谱柱

4.6 × 250mm5 μm100 Å

VH952505-0

2.1 × 150mm5 μm100 Å

VH951502-0

针式过滤器

0.22 μm,直径13mm, 200/Pk

AS021320

双氰胺对照品

500 mg /瓶,含量≥99.0%

DCD-0001

1 g /瓶,含量≥99.0%

DCD-0002

离心管

50 mL,带螺纹盖,25/

LXG0050

一次性注射器

5 mL,100/pk

ZSQ-5ML

15位氮吹仪

15

NV15-M

应用编号:AF10045

  • Cleanert MAS-QuEChERS 系列

    MAS-Q 系列产品是博纳艾杰尔科技基于QuEChERS开发了一系列样品快速处理产品,可以应用于农药残留检测,兽药残留检测,食品添加剂检测等多种领域;

  • Venusil HILIC

    Venusil HILIC 色谱柱,键合相为中性的酰胺基团。在处理强极性化合物方面,Venusil HILIC 色谱柱比反相C18 色谱柱表现出更大的优势,利用亲水作用色谱原理,可保留或分离强极性、水溶性碱性有机化合物。

  • 尼龙(Nylon通用)

    广泛的化学相容性(避强酸),良好的柔韧性 ,与大多数试剂相容,低蛋白吸附。 应用于电子、微电子、半导体工业水过滤;药液、饮料、高纯化学品的过滤

  • HPLC 过滤专用一次性注射器

    专业医用注射器厂家生产;节约成本;无需按医疗废弃物处理。

  • 15位干式电模块氮吹仪

    ◆ 操作简洁、灵活、控温方便,可以不受约束的随时调节浓缩的过程。 ◆ 采用喷砂镀铝模块,加热模块为15孔,直径19mm×深度75mm的大容量加热快。 ◆ 吹扫针支架可根据需要上下自由调节高度。 ◆ 进口数字温控器,双数字显示触摸功能,可方便调节加热温度。 ◆ 配气系统的吹扫针能单独关断,可意思处理多个样品。 ◆ 加取样品时可90℃偏转吹扫针座,方便加取。 ◆ 可精确调节吹扫气流量。

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