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高通量固相萃取法用于血红蛋白中二甲基甲酰胺生物标志物的快速萃取分析方法

应用简介

本研究选用DMF在体内的一种名叫3-甲基-5异丙基乙内酰脲(MVH)的代谢产物作为对接触DMF监测的生物标志物,建立了96 孔SPE板快速处理血红蛋白中MVH的方法,以结构类似的MIH作为内标物,LC-MS/MS作为检测手段,为评估DMF长时间累积接触提供解决方案。

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背景

二甲基甲酰胺(DMF)是一种良好的两性有机溶剂,职业接触主要经呼吸道和皮肤途径进入人体。DMF进入人体后,经过代谢生成的活性产物会造成机体肝肾细胞DNA损伤、姐妹染色体交换或组织器官损伤的改变。

本研究选用DMF在体内的一种名叫3-甲基-5异丙基乙内酰脲(MVH)的代谢产物作为对接触DMF监测的生物标志物,建立了96 孔SPE板快速处理血红蛋白中MVH的方法,以结构类似的MIH作为内标物,LC-MS/MS作为检测手段,为评估DMF长时间累积接触提供解决方案。

表1 化合物信息

化合物

名称

CAS

分子量

结构

MIH

3-Methy-5-isobutylhydantion

675854-31-6

170.10

MVH

3-Methyl-5-Isopropylhydantoin

74310-99-9

156.18

材料及仪器

Cleanert MAS-B 96孔SPE板;Cleanert M96 生物样品前处理仪;96孔接收板;Venusil MP C18(2.1*150mm,5μm,100Å);API4000+ LC-MS/MS。

样品处理方法

准确称取0.1g血红蛋白样品,置于15ml离心管中,准确加入MIH标准溶液20μg/mL 0.25mL,再加入盐酸-醋酸(2:1,v/v)溶液4.75mL。震荡混匀3min。将样品瓶于沸水浴中加热降解1h (反应过程可能会产生气泡,小心操作),取出冷却至室温,用甲醇:水(1:1,v/v)溶液定容至5mL。混匀后,取200μL溶液,各5份,加至96孔板,各加入600μL 1%甲酸乙腈溶液,用移液枪或混合器将溶液混匀。使用Cleanert M96 生物样品前处理仪,控制压力,使样品慢速流出流速约1滴/2s。将净化后的样品转移,待检测。

仪器检测条件

HPLC条件

色谱柱:Venusil MP C18(2.1*150mm,5μm,100Å)

流速:200μL/min;流动相:0.1%甲酸水/乙腈(65/35,v/v)

进样量:2μL;柱温:30℃

质谱条件

扫描模式:电喷雾电离正模式

采集模式:多反应监测(MRM)

表2 质谱参数

化合物

保留时间/min

Q1

Q3

DP

CE

MVH

2.8

157.2

129.1

61

16

71.9

66

23

55.2

65

37

MIH

3.4

171.1

143.1

62

18

86

66

22

69

62

29

结果

 图1 标准溶液色谱图(MVH、MIH浓度均为250ng/mL)

 图2 血红蛋白样品色谱图

 

图3 样品加标色谱图(加标浓度为50mg/kg)

表3 血红蛋白样品加标回收率

名称

加入量(mg•kg-1

平均实际量(mg•kg-1

平均回收率(n=5)

RSD(n=5)

LOD

ng.mL-1

MVH

50

50.2

100.4%

3.5%

1  

结论

实验结果表明采用Cleanert MAS-B 96孔SPE板能够对血红蛋白中的DMF在体内的代谢物3-甲基-5异丙基乙内酰脲(MVH) 进行快速萃取,从而达到检测体内DMF水平的目的。采用LC-MS/MS分析,最低检测限可达到1 ng/mL。

订货信息

产品名称

规格/包装

订货号

Cleanert MAS-B 96孔板

30mg/2mL/well

MS-B-0302W

Cleanert M96 生物样品前处理仪

96孔板匹配

SPE-M96

96孔接收板

1mL,与96孔板匹配

96SP1036

Venusil MP C18

2.1*150mm5μm100Å

VA951502-0

乙腈

LC-MS, 4*2.5L/

LC015

LC-MS级,4*2.5L/

LC365

10mL棕色样品瓶

100/pk

1509-1800

10mL样品瓶瓶盖

100/pk

1515-1748

应用编号:YB10001

  • Cleanert MAS-QuEChERS

    MAS-Q 系列产品是博纳艾杰尔科技基于QuEChERS开发了一系列样品快速处理产品,可以应用于农药残留检测,兽药残留检测,食品添加剂检测等多种领域

  • Cleanert M96 生物样品前处理仪

    Cleanert M96 生物样品前处理仪是专为高通量药物研发及临床药物检测而设计的一款正压型样品前处理装置,适用于96孔蛋白沉淀板、固相萃取板、SLE板、MAS板及过滤板。具有设计紧凑、操作简单、使用方便的特点。

  • Cleanert PPT 96 孔蛋白沉淀板

    Cleanert PPT 产品系列采用高纯蛋白沉淀专用筛板,可以有效阻截乙腈等常用蛋白沉淀溶剂,不会发生穿透现象,在样品处理完毕后,施加正压或负压用以收集流出液;从而实现血浆(或血清、尿液等)样品处理的高通量化处理,节省研究人员的体力和宝贵时间。该系列产品兼容各种自动化前处理装置,方便快捷,是一款高通量的前处理产品;

  • Venusil MP C18

    Venusil MP C18 是一款通用型制备柱,适用于分离 极性和非极性化合物。

  • Burdick&Jackson溶剂

    Burdick&Jackson 是美国Honeywell( 霍尼韦尔) 跨国公司下属专门生产溶剂系列的生产商,为全美溶剂市场占有率最大的公司。B&J 提供46 种不同品种和规格的溶剂,可满足气相、液相、分光光度、农药残留分析,有机合成等方面的应用。作为高纯溶剂生产商,B&J 以ISO9001 作为质量保证体系,并且可满足GMP 用户的要求。

  • ND9(广口)

    广口短螺纹样品瓶 适配:Agilent Thermo Scientific Varian Waters etc.

资料名称 资料形式 时间
样本 2016年03月16日
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