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应用Cleanert MAS-M对粪便样品中花生四烯酸进行萃取

应用简介

脂肪酸:不饱和脂肪酸是构成体内脂肪的一种脂肪酸,人体必需的脂肪酸。花生四烯酸(AA)是一种在生物体内含量较高, 分布最广的多不饱和必需脂肪酸。对粪便样品中花生四烯酸的研究,可为体内脂肪酸代谢提供一定参考信息。

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不饱和脂肪酸是构成体内脂肪的一种脂肪酸,人体必需的脂肪酸。花生四烯酸(AA)是一种在生物体内含量较高, 分布最广的多不饱和必需脂肪酸。对粪便样品中花生四烯酸的研究,可为体内脂肪酸代谢提供一定参考信息。

本实验采用Cleanert MAS-M对粪便样品进行净化处理,建立了粪便样品中花生四烯酸含量检测方法。

目标物信息

材料与仪器

Cleanert MAS-M 96孔萃取板;Cleanert M96 生物样品前处理仪;Cleanert V96 氮吹浓缩仪;96孔接收板;PTFE过滤头;Venusil ASB C18(2.1*50mm,3μm,150Å);API 4000+ LC-MS/MS串联质谱。

样品处理方法

样品前处理

称取50mg粪便样品加入5mL离心管中,向其中加入0.5mL 1%甲酸水,涡旋混匀2min,再向其中加入1.5mL甲醇,涡旋,6000r/min离心5min,取上清液;重复上述步骤再提取一次,合并上清液,过0.22μm PTFE滤头,向其中加入0.6mL氨水,使上样液中含有4%氨水,待净化。

净化过程

所用SPE为Cleanert MAS-M 96孔萃取板

活化:甲醇600μL,水600μL

上样:待净化液全部上样,上样液弃去

淋洗:水600μL,甲醇600μL,弃去

洗脱:3%甲酸乙腈溶液600μL,使用96孔收集板将洗脱液分别收集。

将收集板放置于96位氮吹仪上,将温度设定为45℃,开启氮气将洗脱液氮吹至近干,并用100μL乙腈/水(7/3,v/v)将样品重溶,进样检测。

仪器检测条件

HPLC条件

色谱柱:Venusil ASB C18(2.1*50mm,3μm,150Å)

流速:200μL/min

柱温:30℃

进样量:5μL

流动相:乙腈/水(75/25,v/v)

质谱条件

扫描模式:电喷雾电离负模式

采集模式:多反应监测(MRM)

表1 质谱参数

化合物

Q1

Q3

DP

CE

花生四烯酸

303.0

259.1

-109

-18

303.0

230.9

-85

-29

303.0

205.1

-107

-20

303.0

177.1

-90

-30

图1 花生四烯酸标准溶液色谱图(浓度为5ppm)

图2 粪便样品色谱图

图3 粪便样品加标色谱图(加标浓度为10mg/kg)

实验所用的粪便样品中含有约3mg/kg的花生四烯酸,计算加标回收率时需要扣除样品中目标物的含量。

表2 回收率数据

加标浓度

平均加标回收率

LOD

10mg/kg

88.9%

1μg/kg

结论

本实验采用Cleanert MAS-M 96孔板对粪便样品中的花生四烯酸进行批量样品高通量前处理。实验结果表明Cleanert MAS-M能够有效除去干扰物,并能够对花生四烯酸进行定量萃取,回收率达到88.9%,可以满足日常对批量生物样品分析的需求。

订货信息表

产品名称

规格/包装

订货号

Cleanert MAS-M

96孔板,50mg/2mL

MS-M-0502W

PTFE滤头

0.22μm200/pk

AS041320

Cleanert V96 氮吹浓缩仪

96孔板匹配

NV96-G

Cleanert M96 生物样品前处理仪

96孔板匹配

SPE-M96

96孔接收板

2mL/well,与96孔板匹配

96SP2036-Y

Venusil ASB C18

2.1*50mm3μm150Å

VS930502-0

乙腈

LC-MS, 4*2.5L/

LC015

LC-MS级,4*2.5L/

LC365

甲醇

HPLC, 4*4L

AH230-4

1.5mL棕色进样样品瓶

100/pk

1109-0520

进样样品瓶瓶盖

100/pk

0915-1819

样品瓶内插管

100/pk

0609-0357

应用编号:YB10002

  • Cleanert PPT 96 孔蛋白沉淀板

    Cleanert PPT 产品系列采用高纯蛋白沉淀专用筛板,可以有效阻截乙腈等常用蛋白沉淀溶剂,不会发生穿透现象,在样品处理完毕后,施加正压或负压用以收集流出液;从而实现血浆(或血清、尿液等)样品处理的高通量化处理,节省研究人员的体力和宝贵时间。该系列产品兼容各种自动化前处理装置,方便快捷,是一款高通量的前处理产品;

  • Cleanert V96 氮吹浓缩仪

    Cleanert V96 氮吹浓缩仪是专为快速高效蒸发溶剂、浓缩样品而设计,采用独特氮气加热方式,保温传热管导入气体,同时作用于每个样品管,受热均匀,浓缩效率高,一致性好。

  • Cleanert M96 生物样品前处理仪

    Cleanert M96 生物样品前处理仪是专为高通量药物研发及临床药物检测而设计的一款正压型样品前处理装置,适用于96孔蛋白沉淀板、固相萃取板、SLE板、MAS板及过滤板。具有设计紧凑、操作简单、使用方便的特点。

  • Venusil ASB C18

    Venusil ASB 采用独特的空间位阻侧链键合基团,保护关键的硅氧键在酸性条件下免受水解作用,在极低pH 条件下稳定,低流失,非常适合LC-MS 应用。

  • Burdick&Jackson溶剂

    Burdick&Jackson 是美国Honeywell( 霍尼韦尔) 跨国公司下属专门生产溶剂系列的生产商,为全美溶剂市场占有率最大的公司。B&J 提供46 种不同品种和规格的溶剂,可满足气相、液相、分光光度、农药残留分析,有机合成等方面的应用。作为高纯溶剂生产商,B&J 以ISO9001 作为质量保证体系,并且可满足GMP 用户的要求。

  • ND9(广口)

    广口短螺纹样品瓶 适配:Agilent Thermo Scientific Varian Waters etc.

资料名称 资料形式 时间
样本 2016年03月16日
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总价为:

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