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LC-MS/MS检测使用96孔蛋白沉淀板测试血浆中普瑞巴林含量

应用简介

普瑞巴林是一种新型钙离子通道调节剂,能阻断电压依赖性钙通道,减少神经递质的释放。该药是一种新型γ-氨基丁酸(GABA)受体激动剂,能阻断电压依赖性钙通道,减少神经递质的释放,临床主要用于治疗外周神经痛以及辅助性治疗局限性部分癫痫发作。

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普瑞巴林是一种新型钙离子通道调节剂,能阻断电压依赖性钙通道,减少神经递质的释放。该药是一种新型γ-氨基丁酸(GABA)受体激动剂,能阻断电压依赖性钙通道,减少神经递质的释放,临床主要用于治疗外周神经痛以及辅助性治疗局限性部分癫痫发作。

普瑞巴林一般为口服用药,其生物利用率可达到或高于90%。在血浆中的血药浓度约0.04到9.5 μg/mL

材料与方法

普瑞巴林(pregabalin),分子式C8H17NO2 ,分子量159.23,CAS : 148553-50-8,pKa 4.2和10.6。其结构式见图1。

普瑞巴林化学结构式

本实验使用96孔蛋白沉淀板对血浆样品进行净化:Cleanert 蛋白沉淀板(Cat: 96CD2025-Q, Spec: 2mL/well, Lot: 150623),96位正压装置,96孔接收板,Venusil MP C18(2) ( 2.1x50mm,5μm,110Å ),以上产品均为天津博纳艾杰尔科技有限公司产品;

LC/MS/MS, API 4000+液相色谱-串联质谱仪(SCIEX)。

血浆为牛血浆。

HPLC条件

色谱柱:Venusil MP C18(2)( 2.1x50mm,5μm,110 Å);

流速:200 μL/min;

柱温:30℃;

进样量:5 μL;

流动相:A-0.1%甲酸水溶液;B-甲醇。

表1. HPLC梯度条件

Step

Total   Time(min)

Flow Rate(µl/min)

A (%)

B  (%)

0

0

200

80

20

1

4

200

80

20

质谱条件

扫描模式:电喷雾电离正模式;

采集模式:多反应监测(MRM);

电喷雾电压:4500V;

气帘气(curtain gas):30;

雾化气(gas 1):60;

辅助气(gas 2):30;

离子源温度(TEM):450℃

表2 串联质谱参数

化合物

保留时间

Q1

Q3

DP

CE

普瑞巴林

1.98 min

160.2

142.1(定量)

50

15

125

50

19

97

50

21

样品处理方法

蛋白沉淀

将50 μL血浆和50 μL甲醇/水(1/1)提前混合。然后向96孔板中加入500 μL甲醇,再将上面混好的血浆加到孔中,用移液器反复抽吸几次或使用漩涡混合器混合;

使用SPE-M96正压装置,调节压力,将液体收集到96孔收集板中,3分钟后停止正压装置;

向收集板中各孔中加入400 μL 0.1%甲酸水,混匀,准备检测。

结果与讨论

表3. 血浆中普瑞巴林的回收率情况

加标浓度 (ng/mL)

平均回收率 (n=8)

RSD (n=8)

LOD (ng/mL)

25

96.8%

3.12%

0.3

100

95.9%

5.05%

结论

本实验使用蛋白沉淀板对血浆中的普瑞巴林进行了快速提取检测。在25-100 ng/mL浓度下,平均回收率为96.8%和95.9%,RSD值小于5.05%,可以满足相关的检测需求。

订货信息

产品名称

规格/包装

订货号

Cleanert   蛋白沉淀板

96孔板,2mL/well

96CD2025-Q

Cleanert   M96 生物样品前处理仪

96孔板匹配

SPE-M96

96位接收板

2mL/well,与96孔板匹配

96SP2036-2

Venusil MP C18(2)

2.1*50mm,5μm,110 Å

VA950502-2

甲醇

LC-MS,   4*2.5L

LC230

LC-MS级,4*2.5L/

LC365

应用编号:YB10008

  • Cleanert PPT 96 孔蛋白沉淀板

    Cleanert PPT 产品系列采用高纯蛋白沉淀专用筛板,可以有效阻截乙腈等常用蛋白沉淀溶剂,不会发生穿透现象,在样品处理完毕后,施加正压或负压用以收集流出液;从而实现血浆(或血清、尿液等)样品处理的高通量化处理,节省研究人员的体力和宝贵时间。该系列产品兼容各种自动化前处理装置,方便快捷,是一款高通量的前处理产品;

  • Cleanert M96 生物样品前处理仪

    Cleanert M96 生物样品前处理仪是专为高通量药物研发及临床药物检测而设计的一款正压型样品前处理装置,适用于96孔蛋白沉淀板、固相萃取板、SLE板、MAS板及过滤板。具有设计紧凑、操作简单、使用方便的特点。

  • Venusil MP C18 (2)

    Venusil MP C18(2) 是在畅销的维纳斯一代(Venusil MP C18) 的基础上,精心优化填料性质,采用新型的键合工艺升级而来的一款通用型反相色谱柱。它完美平衡了亲水能力、反相保留能力、分离能力、耐污染能力的关系,为极性范围大的混合物样品提供了均衡的保留能力,对碱性化合物具有对称的峰型,因而具有较为通用的适用能力。该款色谱柱可足大部分的色谱分析需求,免除色谱柱选型的困扰,同时受流动相pH 值、缓冲盐浓度的变化影响较小,可增加色谱行为

  • Burdick&Jackson溶剂

    Burdick&Jackson 是美国Honeywell( 霍尼韦尔) 跨国公司下属专门生产溶剂系列的生产商,为全美溶剂市场占有率最大的公司。B&J 提供46 种不同品种和规格的溶剂,可满足气相、液相、分光光度、农药残留分析,有机合成等方面的应用。作为高纯溶剂生产商,B&J 以ISO9001 作为质量保证体系,并且可满足GMP 用户的要求。

资料名称 资料形式 时间
样本 2016年03月16日
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