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血清中类固醇激素的检测-Cleanert SLE

应用简介

类固醇激素又称为甾体激素,是内分泌细胞分泌的高效能生物化学物质。它们在维持生命、调节机体物质代谢、促进性器官发育和维持生育等方面起着重要作用。液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)可同时对多种标志物进行检测。

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类固醇激素又称为甾体激素,是内分泌细胞分泌的高效能生物化学物质。它们在维持生命、调节机体物质代谢、促进性器官发育和维持生育等方面起着重要作用。

类固醇激素在体内的含量较低,对其准确定量具有重要意义。本实验采用Cleanert SLE对血清样品进行净化,建立了血清中类固醇激素的检测方法,可为临床研究提供参考。

目标物信息

表1 目标物结构信息

名称

CAS

结构

可的松

53-06-5

黄体酮

57-83-0

睾酮

58-22-0

勃地酮

846-48-0

材料

Cleanert SLE (200mg/3mL);Cleanert M96 生物样品前处理仪;Cleanert V96 氮吹浓缩仪;Venusil ASB C18(2.1*50mm,3μm,150 Å);API 4000+。

样品处理方法

移取200μL血清样品至样品管中,并加入一定体积的甲醇,使溶液中甲醇的含量为5%,摇匀待净化。

将经过预处理的血清样品上样至Cleanert SLE中,可开启负压装置(真空度<-0.04MPa)将样品抽过上筛板或使用Cleanert M96 生物样品前处理仪将样品压下筛板,待样品全部流至填料中后,静止10min。

在每孔中加入600μL甲基叔丁基醚(MTBE)用于目标物的洗脱,控制洗脱速度为1~2mL/min,在第一次洗脱完成之后,间隔1min再进行第二次洗脱,合并洗脱液。

将合并的洗脱液用96位氮吹仪进行氮吹浓缩,温度设定为40℃,氮吹至近干。

使用200μL乙腈/水(3/7,v/v)将样品进行重溶,摇匀,进样检测。

仪器检测条件

正模式方法(针对黄体酮、睾酮、勃地酮)

HPLC条件

色谱柱:Venusil ASB C18(2.1*50mm,3μm,150 Å)

流速:200μL/min

柱温:30℃

进样量:5μL

流动相:水/乙腈(45/55,v/v)

质谱条件

扫描模式:电喷雾电离正模式

采集模式:多反应监测(MRM)

表2 质谱参数

ID

保留时间/min

Q1

Q3

DP

CE

勃地酮

1.66

287.3

121.3

110

30

287.3

135.3

109

24

睾酮

1.95

289.3

97.1

114

30

289.3

109.2

115

36

黄体酮

4.16

315.4

97.1

95

35

315.4

109.1

95

39

负模式方法(针对可的松)

HPLC条件

色谱柱:Venusil ASB C18(2.1*50mm,3μm,150 Å)

流速:200μL/min

柱温:30℃

进样量:5μL

流动相:水/乙腈(70/30,v/v)

质谱条件

扫描模式:电喷雾电离负模式

采集模式:多反应监测(MRM)

表3 质谱参数

ID

保留时间/min

Q1

Q3

DP

CE

可的松

 

2.55

405.3

359

-60

-12

405.3

328.8

-40

-18

405.3

300.9

-55

-26

结果

表4 数据结果

化合物

加标回收率-1

加标回收率-2

LOD/ng/mL

黄体酮

67.90%

63.48%

0.15

睾酮

86.94%

78.57%

0.04

勃地酮

97.78%

94.07%

0.12

可的松

103.53%

107.69%

0.02

图1 可的松标准溶液色谱图(浓度为5 ng/mL)

图2 勃地酮、睾酮与黄体酮标准溶液色谱图(浓度为5 ng/mL)

图3 血清样品色谱图(负模式)

图4 血清样品色谱图(正模式)

图5 血清加标样色谱图(负模式-加标浓度为5ng/mL)

图6 血清加标样色谱图(正模式-加标浓度为5ng/mL)

订货信息表

产品名称

规格/包装

订货号

Cleanert SLE

96深孔板,200mg/3mL

HC2003-9

96孔板负压装置

96孔板匹配

VM96

Cleanert M96 生物样品前处理仪

96孔板匹配

SPE-M96

Cleanert V96 氮吹浓缩仪

96孔板匹配

NV96-G

96孔接收板

2mL/well,与96孔板匹配

96SP2036-2

Venusil ASB C18

2.1*50mm3μm,150 Å

VS930502-0

乙腈

HPLC, 4*4L

AH015-4

LC-MS级,4*2.5L/

LC365

应用编号:YB10010

  • Cleanert SLE 系列 —— 传统液液萃取的终结者!

    Cleanert SLE 固相支持液液萃取产品,采用特殊工艺处理过的硅藻土,具有最大的比表面积和最低的表面活性,能够提供一个理想的液液分配的支撑表面,可以代替大部分传统的液液萃取方法。该方法可以应用于制药,药物代谢分析,生化分析,纺织业,食品,环境等多个领域

  • Cleanert V96 氮吹浓缩仪

    Cleanert V96 氮吹浓缩仪是专为快速高效蒸发溶剂、浓缩样品而设计,采用独特氮气加热方式,保温传热管导入气体,同时作用于每个样品管,受热均匀,浓缩效率高,一致性好。

  • Cleanert M96 生物样品前处理仪

    Cleanert M96 生物样品前处理仪是专为高通量药物研发及临床药物检测而设计的一款正压型样品前处理装置,适用于96孔蛋白沉淀板、固相萃取板、SLE板、MAS板及过滤板。具有设计紧凑、操作简单、使用方便的特点。

  • Venusil ASB C18

    Venusil ASB 采用独特的空间位阻侧链键合基团,保护关键的硅氧键在酸性条件下免受水解作用,在极低pH 条件下稳定,低流失,非常适合LC-MS 应用。

  • Burdick&Jackson溶剂

    Burdick&Jackson 是美国Honeywell( 霍尼韦尔) 跨国公司下属专门生产溶剂系列的生产商,为全美溶剂市场占有率最大的公司。B&J 提供46 种不同品种和规格的溶剂,可满足气相、液相、分光光度、农药残留分析,有机合成等方面的应用。作为高纯溶剂生产商,B&J 以ISO9001 作为质量保证体系,并且可满足GMP 用户的要求。

资料名称 资料形式 时间
样本 2016年03月16日
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