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基于Cleanert MAS-M的血浆中多不饱和脂肪酸萃取净化方法

应用简介

多不饱和脂肪酸是人体生长和健康所必须的物质,它们不仅是细胞结构的组成部分,还具有调节生理功能的重要意义,准确定量人血浆中多不饱和脂肪酸的含量对多种疾病的防治具有重要意义。而目前多不饱和脂肪酸较为先进及可靠的检测方法为LC-MS/MS法,但该检测方法容易受到血浆中的杂质如磷脂、蛋白质的影响,会产生基质增强或抑制效应。

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多不饱和脂肪酸是人体生长和健康所必须的物质,它们不仅是细胞结构的组成部分,还具有调节生理功能的重要意义,准确定量人血浆中多不饱和脂肪酸的含量对多种疾病的防治具有重要意义。而目前多不饱和脂肪酸较为先进及可靠的检测方法为LC-MS/MS法,但该检测方法容易受到血浆中的杂质如磷脂、蛋白质的影响,会产生基质增强或抑制效应。本应用提供一种可很好去除血浆中磷脂、蛋白质等干扰物质,且保证多不饱和脂肪酸具有良好回收率的净化方法。

多不饱和脂肪酸为含有两个或两个以上双键且碳链长度为18~22个碳原子的一类直链脂肪酸,为结构类似的一类化合物,本应用选用在生物体内含量较高,分布最广的多不饱和必需脂肪酸—花生四烯酸(AA)作为目标物,展示本应用方法的优越性。

目标物信息

图1 花生四烯酸结构图

材料及仪器

Cleanert MAS-M;Cleanert M96 生物样品前处理仪;Cleanert V96 氮吹浓缩仪;96孔接收板;PTFE过滤头;Venusil ASB C18(2.1*50mm,3μm,150Å);API 4000+。

样品处理方法

样品预处理

取100μL 3%氨水水溶液稀释100μL血浆样品,涡旋震荡1min保证混合均匀;(若为加标样,先将标准溶液加入至血浆中,并放置1h,再加入3%氨水水溶液进行稀释)

净化过程

将Cleanert MAS-M 96孔板放置于正压装置上,按以下步骤进行试验:

活化:甲醇 600μL,水 600μL;

上样: 将待净化液全部上样,上样液弃去

淋洗:水和甲醇各600μL,弃去。

洗脱:3%甲酸乙腈溶液600μL,使用接收板收集洗脱液,使用LC\MS\MS检测。(可将洗脱液进行浓缩氮吹,可获取更大的浓缩倍数)

仪器检测条件

HPLC条件

色谱柱:Venusil ASB C18(2.1*50mm,3μm,150Å);

流速:200μL/min;

柱温:30℃;

进样量:5μL;

流动相:乙腈/水(75/25,v/v)

质谱条件

扫描模式:电喷雾电离负模式

采集模式:多反应监测(MRM)

表1 质谱参数

化合物

Q1

Q3

DP

CE

花生四烯酸

303.0

259.1

-109

-18

303.0

230.9

-85

-29

303.0

205.1

-107

-20

303.0

177.1

-90

-30

结果

图2 500ppb标准溶液色谱图

图3 人血浆样品色谱图

图4 人血浆加标样色谱图(加标浓度为500ppb)

实验所用血浆中花生四烯酸的的含量约为2.9mg/L,计算加标回收率时需要扣除样品中目标物的含量。

表2 加标回收率及精密度数据

加标浓度/ppm

1

2

3

4

5

6

7

8

平均回收率

RSD
 
n=8

n=8

0.5

109.2%

101.3%

105.6%

107.3%

116.3%

112.4%

114.6%

112.2%

109.9%

4.5%

2

100.1%

92.6%

96.3%

96.7%

110.2%

108.7%

109.2%

103.4%

102.2%

6.6%

结论

本实验采用Cleanert MAS-M 96孔板对血浆中花生四烯酸进行萃取净化,并用LC-MS/MS对萃取产物进行定量分析。结果表明该方法可用于日常对大量血浆样品中花生四烯酸进行高通量快速前处理,也可用于多不饱和脂肪酸研究工作。

订货信息表

产品名称

规格/包装

订货号

Cleanert MAS-M

96孔板,50mg/2mL

MS-M-0502W

Cleanert V96 氮吹浓缩仪

与96孔板匹配

NV96-G

Cleanert M96 生物样品前处理仪

与96孔板匹配

SPE-M96

96孔接收板

2mL/well,与96孔板匹配

96SP2036-Y

Venusil ASB C18

2.1*50mm,3μm,150Å

VS930502-0

乙腈

LC-MS级, 4*2.5L/箱

LC015

LC-MS级,4*2.5L/箱

LC365

甲醇

HPLC, 4*4L

AH230-4

应用编号:YB10015


  • Cleanert MAS-QuEChERS

    MAS-Q 系列产品是博纳艾杰尔科技基于QuEChERS开发了一系列样品快速处理产品,可以应用于农药残留检测,兽药残留检测,食品添加剂检测等多种领域

  • Cleanert V96 氮吹浓缩仪

    Cleanert V96 氮吹浓缩仪是专为快速高效蒸发溶剂、浓缩样品而设计,采用独特氮气加热方式,保温传热管导入气体,同时作用于每个样品管,受热均匀,浓缩效率高,一致性好。

  • Cleanert M96 生物样品前处理仪

    Cleanert M96 生物样品前处理仪是专为高通量药物研发及临床药物检测而设计的一款正压型样品前处理装置,适用于96孔蛋白沉淀板、固相萃取板、SLE板、MAS板及过滤板。具有设计紧凑、操作简单、使用方便的特点。

  • Venusil ASB C18

    Venusil ASB 采用独特的空间位阻侧链键合基团,保护关键的硅氧键在酸性条件下免受水解作用,在极低pH 条件下稳定,低流失,非常适合LC-MS 应用。

  • Burdick&Jackson溶剂

    Burdick&Jackson 是美国Honeywell( 霍尼韦尔) 跨国公司下属专门生产溶剂系列的生产商,为全美溶剂市场占有率最大的公司。B&J 提供46 种不同品种和规格的溶剂,可满足气相、液相、分光光度、农药残留分析,有机合成等方面的应用。作为高纯溶剂生产商,B&J 以ISO9001 作为质量保证体系,并且可满足GMP 用户的要求。

资料名称 资料形式 时间
样本 2016年03月16日
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