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应用Cleanert MAS-MAW萃取板对小鼠血清中多种胆汁酸萃取净化

应用简介

胆汁酸:胆汁酸是几种结构类似的类固醇酸的统称,由一个含四元环的甾核、一个末端为羧酸的5~8个碳侧链以及数目和方向不等的羟基组成。 熊去氧胆酸、牛磺脱氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸、胆酸、去氧胆酸、石胆酸、鹅去氧胆酸、牛磺胆酸钠

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胆汁酸(bile acid, BA)为胆固醇的系列衍生物,是人体脂肪代谢的必需物质,正常情况下,大部分BA都参与肠肝循环,血清中胆汁酸是衡量肝胆功能正常与否的重要标志物。

胆汁酸是几种结构类似的类固醇酸的统称,由一个含四元环的甾核、一个末端为羧酸的5~8个碳侧链以及数目和方向不等的羟基组成。

本实验采用Cleanert MAS-MAW 96孔萃取板进行样品净化处理,考察胆汁酸在血清样品中的加标回收率,建立SPE方法对血清样品进行净化处理。

目标物信息

表1 目标物信息

ID序号

化合物

CAS

简称

结构

1

熊去氧胆酸

128-13-2

UDC

2

牛磺脱氧胆酸

14605-22-2

TUDC

3

牛磺鹅去氧胆酸

516-35-8

TCDC

4

胆酸

81-25-4

C

5

去氧胆酸

83-44-3

DC

6

石胆酸

434-13-9

LC

7

鹅去氧胆酸

474-25-9

CDC

8

牛磺胆酸钠

145-42-6

TCAS

材料及仪器

Cleanert MAS-MAW 96孔萃取板;PTFE滤头;Cleanert M96 生物样品前处理仪;Cleanert V96 氮吹浓缩仪;96孔接收板;Durashell C18-AM(2.1*150mm,3μm,100Å);API 4000+。

样品处理方法

样品预处理

(1)血清样品:取100μL血清于样品瓶中,加入100μL 1%甲酸水溶液,将其摇匀,待净化。

(2)血清加标样:取100μL血清于样品瓶中,加入2μL浓度为10μg/mL的胆汁酸混标,并将其摇匀,待净化。

SPE过程

活化:2mL乙腈,2mL 3%甲酸水溶液

上样:200μL 经过预处理的血清

淋洗:2mL50%甲醇水,淋洗液弃去

洗脱:先用2mL甲醇进行洗脱,再用2mL 三乙胺-水-甲醇混合液(2%-10%-88%)洗脱,将洗脱液合并,在40℃下氮吹干,残渣用200μL 甲醇/水(7:3,v/v)溶解,随后用0.22μm PTFE滤头过滤,收集滤出液,进样检测。

仪器检测条件

HPLC条件

色谱柱:Durashell C18-AM(2.1*100mm,3μm,100Å)

流速:200μL/min

柱温:30℃;进样量:5μL

表2 梯度条件

t/min

-10mM乙酸铵,0.04%氨水水溶液

乙腈

0

65

35

1

65

35

3

55

45

5.5

40

60

5.6

65

35

12

65

35

质谱条件

扫描模式:电喷雾电离负模式

采集模式:多反应监测(MRM)

表3 参数信息

化合物

简称

tR/min

Q1

Q3

DP/V

CE/V

胆酸

CA

1.23

407.3

407.3

-130

-10

熊去氧胆酸

UDC

1.24

391.3

391.3

-145

-11

牛磺脱氧胆酸

TUDC

1.35

498.4

498.4

-157

-9

牛磺胆酸钠

TCS

1.36

514.3

514.3

-150

-7

鹅去氧胆酸

CDC

1.72

391.4

391.4

-139

-8

去氧胆酸

DC

2.01

391.5

391.5

-130

-10

牛磺鹅去氧胆酸

TCDC

2.36

498.3

498.3

-130

-10

石胆酸

LC

4.08

375.4

375.4

-127

-10

结果

表4 样品加标回收率

样品

牛磺脱氧胆酸

牛磺胆酸钠

牛磺鹅去氧胆酸

熊去氧胆酸

胆酸

鹅去氧胆酸

去氧胆酸

石胆酸

加标样1

95.2%

116.1%

100.0%

114.7%

106.0%

115.0%

109.1%

116.4%

加标样2

82.7%

111.4%

99.1%

130.8%

117.6%

106.3%

90.9%

108.6%

图1 8组分出峰顺序图(ID序号见表1)

结论

本实验对小鼠血清中八种胆汁酸进行分析,采用Cleanert MAS-MAW 96孔萃取板对样品进行前处理。结果表明,Cleanert MAS-MAW 96孔萃取板可以作为高通量样品前处理材料用于大量血清样品中胆汁酸的快速萃取,结合LC-MS/MS检测,能够对血清中多种胆汁酸进行定量分析。

订货信息表

产品名称

规格/包装

订货号

Cleanert MAS-MAW

96孔板,100mg/well

MAW0302-W

PTFE滤头

0.22μm,200/pk

AS041320

Cleanert V96 氮吹浓缩仪

与96孔板匹配

NV-96G

Cleanert M96 生物样品前处理仪

与96孔板匹配

SPE-M96

Durashell C18 AM

2.1*150mm3μm100Å

DC931502-AM

乙腈

LC-MS, 4*2.5L/

LC015

LC-MS级,4*2.5L/

LC365

甲醇

HPLC, 4*4L

AH230-4

1.5mL棕色进样样品瓶

100/pk

1109-0520

进样样品瓶瓶盖

100/pk

0915-1819

10mL棕色样品瓶

100/pk

1509-1800

10mL样品瓶瓶盖

100/pk

1515-1748

应用编号:YB10018

  • Cleanert MAS-QuEChERS

    MAS-Q 系列产品是博纳艾杰尔科技基于QuEChERS开发了一系列样品快速处理产品,可以应用于农药残留检测,兽药残留检测,食品添加剂检测等多种领域

  • Cleanert V96 氮吹浓缩仪

    Cleanert V96 氮吹浓缩仪是专为快速高效蒸发溶剂、浓缩样品而设计,采用独特氮气加热方式,保温传热管导入气体,同时作用于每个样品管,受热均匀,浓缩效率高,一致性好。

  • Cleanert M96 生物样品前处理仪

    Cleanert M96 生物样品前处理仪是专为高通量药物研发及临床药物检测而设计的一款正压型样品前处理装置,适用于96孔蛋白沉淀板、固相萃取板、SLE板、MAS板及过滤板。具有设计紧凑、操作简单、使用方便的特点。

  • ND9(广口)

    广口短螺纹样品瓶 适配:Agilent Thermo Scientific Varian Waters etc.

资料名称 资料形式 时间
样本 2016年03月16日
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总价为:

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