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LC/MS/MS检测血清中类固醇激素-Cleanert PEP

应用简介

类固醇激素又称为甾体激素,是内分泌细胞分泌的高效能生物化学物质。它们在维持生命、调节机体物质代谢、促进性器官发育和维持生育等方面起着重要作用。液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)可同时对多种标志物进行检测。

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类固醇激素又称为甾体激素,是内分泌细胞分泌的高效能生物化学物质。它们在维持生命、调节机体物质代谢、促进性器官发育和维持生育等方面起着重要作用。

类固醇激素在体内的含量较低,对其准确定量具有重要意义。本实验采用Cleanert® PEP 96微孔板对血清样品进行净化,建立了血清中类固醇激素的检测方法,该方法适合高通量样品前处理。

目标物信息

表1 化合物结构

化合物

英文名

CAS

分子量

结构

氢化可的松

Hydrocortisone

50-23-7

362.46

睾酮

Testosterone

58-22-0

 288.42

黄体酮

Progesterone

57-83-0

386.5244

醛固酮

Aldosterone

52-39-1

360.44

脱氢表雄酮

Dehydroepiandrosterone

53-43-0

288.4

材料及仪器

Cleanert PEP 96微孔板(5mg/1mL);96孔板正压装置;96位接收板;Venusil ASB C18(2.1*50mm,3μm,150 Å);API 4000+。

 样品处理方法

 样品预处理

100μL血清样品与100μL 含有1%甲酸的甲醇/水溶液混合(50/50,v/v)

SPE过程

活化:依次用200μL甲醇、200μL水活化;

上样:将预处理过的血清样品上样至96孔板中;

淋洗:加入400μL甲醇/水(35/65, v/v)用于淋洗样品中的干扰物;

洗脱:加入200μL 1%甲酸甲醇,用96位收集板收集洗脱液用于LC-MS/MS检测。(将洗脱液氮吹浓缩可获得更低的检测限)

仪器检测条件

HPLC条件

色谱柱:Venusil ASB C18(2.1*50mm,3μm,150Å)

流速:200μL/min

柱温:30℃

进样量:3μL

流动相:0.1%甲酸水/0.1%甲酸乙腈( 40/ 60,v/v)

质谱条件

扫描模式:电喷雾电离正模式

采集模式:多反应监测(MRM)

表2 参数信息

ID

tR/min

Q1

Q3

DP

CE

氢化可的松

0.98

363.2

120.9

74

40

363.2

327.2

70

23

睾酮

1.66

289.4

97.1

100

31

289.4

109.1

90

40

醛固酮

0.98

361.3

325.3

84

30

361.3

315.4

77

29

脱氢表雄酮

1.66

289.4

253.4

70

24

289.4

213.1

71

23

黄体酮

3.15

315.4

97.1

95

35

315.4

109.1

95

39

结果

图1 30ppb类固醇激素标准溶液色谱图

图2 血清样品色谱图

图3 血清加标样色谱图(浓度为30ppb)

表3 加标回收率数据

加标浓度

醛固酮

氢化可的松

睾酮

脱氢表雄酮

黄体酮

30ppb

85.9%

87.0%

105.5%

110.6%

97.7%

结论

在临床检验中类固醇激素是一个难点。本实验使用Cleanert® PEP 96孔板提取血清中的类固醇,加快了检测速度,相较免疫法提高了最低检测浓度,回收率高于85%,可满足实验室检测相关物质的需要。

订货信息表

产品名称

规格/包装

订货号

Cleanert PEP

96微孔板,5mg/1mL

PE00501-MW

Cleanert M96 生物样品前处理仪

96孔板匹配

SPE-M96

Cleanert V96 氮吹浓缩仪

96孔板匹配

NV-96G

96位接收板

1mL,与96孔板匹配

96SP1036-Y

Venusil ASB C18

2.1*50mm3μm,150   Å

VS930502-0

甲醇

HPLC4*4L

AH230-4

乙腈

HPLC4*4L

AH015-4

LC-MS级,4*2.5L/

LC365

应用编号:YB10007

  • Cleanert PEP

    Cleanert PEP(Polar Enhanced Polymer)官能化聚苯乙烯/二乙烯苯萃取柱。表面同时具有亲水性和憎水性基团,从而对各类极性,非极性化合物具有较均衡的吸附作用。

  • Cleanert M96 生物样品前处理仪

    Cleanert M96 生物样品前处理仪是专为高通量药物研发及临床药物检测而设计的一款正压型样品前处理装置,适用于96孔蛋白沉淀板、固相萃取板、SLE板、MAS板及过滤板。具有设计紧凑、操作简单、使用方便的特点。

  • Cleanert V96 氮吹浓缩仪

    Cleanert V96 氮吹浓缩仪是专为快速高效蒸发溶剂、浓缩样品而设计,采用独特氮气加热方式,保温传热管导入气体,同时作用于每个样品管,受热均匀,浓缩效率高,一致性好。

  • Venusil ASB C18

    Venusil ASB 采用独特的空间位阻侧链键合基团,保护关键的硅氧键在酸性条件下免受水解作用,在极低pH 条件下稳定,低流失,非常适合LC-MS 应用。

  • Burdick&Jackson溶剂

    Burdick&Jackson 是美国Honeywell( 霍尼韦尔) 跨国公司下属专门生产溶剂系列的生产商,为全美溶剂市场占有率最大的公司。B&J 提供46 种不同品种和规格的溶剂,可满足气相、液相、分光光度、农药残留分析,有机合成等方面的应用。作为高纯溶剂生产商,B&J 以ISO9001 作为质量保证体系,并且可满足GMP 用户的要求。

资料名称 资料形式 时间
样本 2016年03月16日
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