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Cleanert MAS-MAW应用于萃取小鼠粪便中胆汁酸

应用简介

胆汁酸(bile acid, BA)为胆固醇的系列衍生物,体内约有50%胆固醇是以胆汁酸形式排泄,是体内清除胆固醇的重要途径。粪便中的胆汁酸经过复杂的肠道菌群解离作用已证实主要为一级胆汁酸和次级胆汁酸。目前已有相关研究表明,粪便中胆汁酸的含量与肝脏疾病进展程度相关,建立操作简便、可准确定量的样品前处理方法对临床相关研究具有重要意义。本实验采用Cleanert MAS-MAW进行样品净化处理,考察胆汁酸在粪便样品中的加标回收率,建立SPE方法对粪便样品进行净化处理。

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胆汁酸(bile acid, BA)为胆固醇的系列衍生物,体内约有50%胆固醇是以胆汁酸形式排泄,是体内清除胆固醇的重要途径。粪便中的胆汁酸经过复杂的肠道菌群解离作用已证实主要为一级胆汁酸和次级胆汁酸。目前已有相关研究表明,粪便中胆汁酸的含量与肝脏疾病进展程度相关,建立操作简便、可准确定量的样品前处理方法对临床相关研究具有重要意义。

本实验采用Cleanert MAS-MAW进行样品净化处理,考察胆汁酸在粪便样品中的加标回收率,建立SPE方法对粪便样品进行净化处理。

目标物信息

ID

化合物

CAS

简称

结构

1

熊去氧胆酸

128-13-2

UDC

2

牛磺脱氧胆酸

14605-22-2

TUDC

3

牛磺鹅去氧胆酸

516-35-8

TCDC

4

胆酸

81-25-4

C

5

去氧胆酸

83-44-3

DC

6

石胆酸

434-13-9

LC

7

鹅去氧胆酸

474-25-9

CDC

8

牛磺胆酸钠

145-42-6

TCAS

材料及仪器

Cleanert MAS-MAW;PTFE滤头;Cleanert M96 生物样品前处理仪;Cleanert V96 氮吹浓缩仪;96孔接收板;Venusil MP C18(2.1*150mm,3μm,100Å);API 4000+.

样品处理方法

样品预处理

称取10mg粪便样品至样品瓶中,并加入3mL甲醇,涡旋2min,超声15min,8000rpm离心5min,将上清液转移至干净样品瓶中,向样品残渣中再加入3mL甲醇,重复提取一次,将上清液合并,并用PTFE过滤头进行过滤,将滤液于45℃下氮吹干,使用1mL 1%甲酸甲醇/水(1:1,v/v)溶液重新溶解,待净化。

SPE过程

活化:2ml乙腈,2ml 3%甲酸水溶液

上样:将待净化液全部上样

淋洗:4mL 50%甲醇水,淋洗液弃去

洗脱:先用2mL甲醇进行洗脱,再用2ml 三乙胺-水-甲醇混合液(2%-10%-88%)洗脱,将洗脱液合并,在40℃下氮吹干,残渣用100μL 甲醇/水(7:3,v/v)溶解。

注:粪便样品中部分胆汁酸的含量较高,可将溶液进一步稀释再进行检测。

仪器检测条件

HPLC条件

色谱柱:Durashell C18-AM(2.1*100mm,3μm,100Å)

流速:200μL/min

柱温:30℃;进样量:5μL

表2 梯度条件

t/min

-10mM乙酸铵,0.04%氨水水溶液

乙腈

0

65

35

1

65

35

3

55

45

5.5

40

60

5.6

65

35

12

65

35

质谱条件

扫描模式:电喷雾电离负模式

采集模式:多反应监测(MRM)

表3 参数信息

化合物

简称

tR/min

Q1

Q3

DP/V

CE/V

胆酸

CA

1.23

407.3

407.3

-130

-10

熊去氧胆酸

UDC

1.24

391.3

391.3

-145

-11

牛磺脱氧胆酸

TUDC

1.35

498.4

498.4

-157

-9

牛磺胆酸钠

TCS

1.36

514.3

514.3

-150

-7

鹅去氧胆酸

CDC

1.72

391.4

391.4

-139

-8

去氧胆酸

DC

2.01

391.5

391.5

-130

-10

牛磺鹅去氧胆酸

TCDC

2.36

498.3

498.3

-130

-10

石胆酸

LC

4.08

375.4

375.4

-127

-10

结果

表4 样品加标回收率

样品

牛磺脱氧胆酸

牛磺胆酸钠

胆酸

牛磺鹅去氧胆酸

熊去氧胆酸

鹅去氧胆酸

去氧胆酸

石胆酸

加标样1

86.40%

83.40%

87.60%

110.98%

114.75%

112.32%

91.43%

106.04%

加标样2

83.10%

84.40%

84.70%

109.00%

107.66%

111.03%

108.57%

93.29%

图1 8组分出峰顺序图(简称见表1)

结论

本实验采用Cleanert MAS-MAW 96孔板对粪便样品中的胆汁酸进行高通量前处理。实验结果表明Cleanert MAS-MAW能够有效除去粪便中的干扰物,对8种胆汁酸进行定量萃取,绝对回收率范围为83%~114%,可以满足日常对批量生物样品分析的需求。

订货信息表

产品名称

规格/包装

订货号

Cleanert MAS-MAW

96孔板,100mg/well

MAW0302-W

PTFE滤头

0.22μm200/pk

AS041320

Cleanert V96 氮吹浓缩仪

96孔板匹配

NV-96G

Cleanert M96 生物样品前处理仪

96孔板匹配

SPE-M96

Durashell C18-AM

2.1*150mm3μm100Å

DC931502-AM

乙腈

LC-MS, 4*2.5L/

LC015

LC-MS级,4*2.5L/

LC365

甲醇

HPLC, 4*4L

AH230-4

1.5mL棕色进样样品瓶

100/pk

1109-0520

进样样品瓶瓶盖

100/pk

0915-1819

10mL棕色样品瓶

100/pk

1509-1800

10mL样品瓶瓶盖

100/pk

1515-1748






  • Cleanert MAS系列

    MAS-Q 系列产品是博纳艾杰尔科技基于QuEChERS开发了一系列样品快速处理产品,可以应用于农药残留检测,兽药残留检测,食品添加剂检测等多种领域;该类产品可以使用的吸附剂种类很多,例如Cleanert Pesticarb除色素,Cleanert®PSA、Cleanert PAX 去除有机酸等酸性物质、Cleanert PCX 去除碱性物质,Cleanert C18去除脂肪,无水硫酸镁去除水份,另外通过加入一些缓冲盐,可以帮助对药物更好的提取。可以采取多种搭配方法,适应不同的前处理需求。

  • 聚四氟乙烯(PTFE疏水)

    广泛的化学相容性;低蛋白吸附;可多次高温灭菌;极低的萃取本底

  • Cleanert V96 氮吹浓缩仪

    Cleanert V96 氮吹浓缩仪是专为快速高效蒸发溶剂、浓缩样品而设计,采用独特氮气加热方式,保温传热管导入气体,同时作用于每个样品管,受热均匀,浓缩效率高,一致性好。

  • Cleanert M96 生物样品前处理仪

    SPE-M96 是专门为高通量药物研发及临床药物检测而设计的一款正压型固相萃取装置,专门用于96 孔板固相萃取模块。该装置采用自动化固相萃取仪通用的正压技术,每个通道压力均等,减少了SPE 孔之间的流速差别,从而提高批量样品萃取的重复性。

  • Durashell C18(L)

    Durashell 色谱柱通过硅胶表面杂化处理技术,在硅胶表面覆盖一种强疏水性保护层,有效防止碱性溶液对硅胶基质的破坏,因此Durashell 色谱柱可在高pH 下使用,并且对碱性化合物有极高的载样量,非常适合碱性化合物的制备分离。 同时,硅胶表面杂化处理可以减弱固定相和化合物间的疏水相互作用,保持高界面动力学系数,从而获得更高的柱效。

  • Durashell C18-AM

    天津博纳艾杰尔科技基于新一代硅胶和键合技术,隆重推出Durashell C18-AM 色谱柱。首先它采用惰性处理技术制备的硅胶,可以在碱性流动相中保持稳定,与传统硅胶相比寿命显著改善;其次具有超强的立体异构识别能力,适用于结构相似化合物的分离,尤其适用于药物中的多种杂质的同时分析。

  • ND9(广口)

    广口短螺纹样品瓶 适配:Agilent Thermo Scientific Varian Waters etc.

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