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基于Cleanert C2 SPE柱的血浆中氯吡格雷活性代谢物的萃取及LC-MS/MS检测方法

应用简介

氯吡格雷是一种新型的噻吩并吡嗪类衍生物,具有抗血小板聚集作用及抗血栓形成作用。氯吡格雷口服后即可被人体快速吸收并代谢,其主要代谢产物为氯吡格雷酸,氯吡格雷的活性代谢物为氯吡格雷氧化成含氧化合物之后水解而成的一种硫醇衍生物,该化合物极不稳定,在血浆中很难检测到。 本文通过衍生化方法,并采用Cleanert C2 SPE柱建立了血浆中氯吡格雷活性代谢物的前处理方法,为氯吡格雷的人体生物等效性研究提供参考方法。

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背景

氯吡格雷是一种新型的噻吩并吡嗪类衍生物,具有抗血小板聚集作用及抗血栓形成作用。氯吡格雷口服后即可被人体快速吸收并代谢,其主要代谢产物为氯吡格雷酸,氯吡格雷的活性代谢物为氯吡格雷氧化成含氧化合物之后水解而成的一种硫醇衍生物,该化合物极不稳定,在血浆中很难检测到。

本文通过衍生化方法,并采用Cleanert C2 SPE柱建立了血浆中氯吡格雷活性代谢物的前处理方法,为氯吡格雷的人体生物等效性研究提供参考方法。

目标物信息

氯吡格雷

氯吡格雷活性代谢物

氯吡格雷活性代谢物衍生物

材料及仪器

Cleanert C2柱(150mg/3mL);Cleanert M08 正压型固相萃取装置;Venusil MP C18(2)(2.1*50mm,5μm,110Å);2-溴-3‘-甲氧基苯乙酮(MPB)。

样品处理方法

样品衍生化

采血后立即向每份血样中加入25μL 500 mM溶解于乙腈中的MPB,轻轻混合(静止10 min),3000rpm离心30 min以分离血浆。将血浆样品保存于-80℃待测。

样品净化

(1)样品预处理:精密吸取血浆400μL,加入550μL 1%蚁酸,涡旋振荡使混匀。

(2)活化:将Cleanert C2柱先后用300μL甲醇和300μL纯水进行预处理。

(3)上样:再将血浆混合物上样至处理过的Cleanert C2柱上。

(4)淋洗:用500 μL 1%蚁酸和500μL 50 mM醋酸铵水溶液冲洗柱子。

(5)洗脱:先后用150μL甲醇和100μL 50 mM醋酸铵进行洗脱

将洗脱物进行LC-MS/MS分析。

仪器检测条件

HPLC条件

色谱柱:Venusil MP C18(2)(2.1*50mm,5μm,100A)

流速:200μL/min;流动相:0.1%甲酸水/乙腈(55/45,v/v)

柱温:30℃;进样量:3μL

质谱条件

扫描模式:电喷雾电离正模式

采集模式:多反应监测(MRM)

表2 质谱参数

Q1

Q3

DP

CE

504

212

65

27

504

184.1

70

40

504

152.1

65

52

结果

对血浆样品进行氯吡格雷活性代谢物加标实验,加标回收率均高于93%,本方法对目标物的LOQ低至0.5ng/mL。

图1 氯吡格雷标准溶液色谱图(浓度为30ng/mL)

图2血浆色谱图

图3血浆加标色谱图

结论

本方法采用Cleanert C2小柱对血浆中氯吡格雷活性代谢物进行萃取分析,样品基质对分析物没有明显干扰,回收率高于93%。该方法适用于血浆中氯吡格雷活性代谢物的日常监测分析。

订货信息表

产品名称

规格/包装

订货号

Cleanert C2

150mg/3mL

S021503

Cleanert M08 正压型固相萃取装置

8位

SPE-M08

氮吹仪

24位

NV24A-Ⅱ

Venusil MP C18(2)

2.1*50mm,5μm,110Å

VA950502-2

甲醇

HPLC, 4*4L

AH230-4

乙腈

LC-MS级, 4*2.5L/箱

LC015

LC-MS级,4*2.5L/箱

LC365

1.5mL棕色进样样品瓶

100/pk

1109-0520

进样样品瓶瓶盖

100/pk

0915-1819

 


  • SPE-M08 正压型多功能固相萃取装置

    适用范围广、操作简单、灵活多变

  • NV24A-II 全自动浓缩氮吹仪

    NV24A-II 全自动浓缩氮吹仪具有处理量大、环保、自动化程度高等优点,应用于各种类型的自动化工作站,遍及环保、供水、药检、食品检验、法医鉴定等领域,适用于较高端样品前处理的实验室要求。

  • Venusil MP C18(2)

    Venusil MP C18(2) 是在畅销的维纳斯一代(Venusil MP C18) 的基础上,精心优化填料性质,采用新型的键合工艺升级而来的一款通用型反相色谱柱。它完美平衡了亲水能力、反相保留能力、分离能力、耐污染能力的关系,为极性范围大的混合物样品提供了均衡的保留能力,对碱性化合物具有对称的峰型,因而具有较为通用的适用能力。该款色谱柱可足大部分的色谱分析需求,免除色谱柱选型的困扰,同时受流动相pH 值、缓冲盐浓度的变化影响较小,可增加色谱行为

  • ND9(广口)

    广口短螺纹样品瓶 适配:Agilent Thermo Scientific Varian Waters etc.

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