前言
香精作为一种可影响食品口感和风味的特殊高倍浓缩添加剂已经被广泛应用到食品生产的各个领域，它可以弥补食品本身的香味缺陷，赋予部分食品生动的原滋味，加强食品的香味，掩盖食物的不良气息。 麦芽酚和乙基麦芽酚是食品中常用的重要的食品增香剂，它们被广泛用在糖果、饼干、糕点和饮料中。但美国儿童科学年报报道过量摄入食用香精、香料会加重肾的负担，有损脏器的发育；欧盟专家委员会报道，大剂量食用香兰素可导致头痛、恶心、呕吐、呼吸困难，甚至损伤肝、肾；而麦芽酚具有弱的致突变活性和诱导细胞死亡的毒性作用，并且它可以控制人体内铁和铝的含量水平。GB2760-2014附录B中明确规定植物油脂中不得添加食品用香料、香精。近年来，一些不法商家在芝麻油、芝麻调和油中掺入香精、香料，以次充好，欺骗消费者。
本实验建立了固相萃取结合高效液相色谱串联质谱检测花生油中麦芽酚&乙基麦芽酚的方法。
实验部分
仪器、试剂与材料
主要仪器设备
AB SCIEX API 4000+质谱仪；
博纳艾杰尔12位负压SPE装置。
试剂材料
甲醇为色谱纯，实验用水为超纯水，甲酸，乙酸铵，甜麦芽酚&乙基麦芽酚标准物质。
一次性无菌注射器；Nylon针式过滤器（0.22 µm，直径13 mm）；
Cleanert® S C18固相萃取柱：500 mg/6 mL。
样品制备
样品提取
称2.00 g花生油样品于15 mL 离心管中，加5 mL甲醇，旋涡震荡5 min，10000 rpm离心5 min，取上层甲醇溶液，待净化。
样品净化
将Cleanert® S C18小柱用5 mL甲醇，5 mL水活化平衡，将待净化液全部上样，用4 mL甲醇洗脱，收集上样液和洗脱液，用甲醇定容到10 mL，过0.22 µm Nylon针式过滤器后待测。
以上净化步骤可用卓睿全自动固相萃取仪完成。
实验条件
液相条件
色谱柱：Venusil® ASB C8，5 µm，150 Å，2.1 × 50 mm；
流动相：A：0.01 mol/L乙酸铵水溶液（含0.2%甲酸）；B：甲醇；
流 速：0.4 mL/min
柱 温：30℃
进样量：5 µL
流动相梯度见表1：
表1. 流动相梯度
时间/min | A/% | B/% |
0.00 | 95 | 5 |
0.50 | 95 | 5 |
2.50 | 5 | 95 |
4.50 | 5 | 95 |
4.51 | 95 | 5 |
7.50 | 95 | 5 |
质谱条件
离子源：ESI+；电喷雾电压：5500 V；雾化气压力：55 psi；气帘气压力：20 psi；辅助气压力：55 psi；离子源温度：550℃； 监测方式：多反应监测（MRM）定性离子对、定量离子、碎裂电压和碰撞能量见表2：
表2. 麦芽酚&乙基麦芽酚的定性离子对、定量离子、碎裂电压和碰撞能量
名称 | 母离子m/z | 子离子m/z | DP /V | CE /eV |
麦芽酚 | 127 | 109* | 71 | 29 |
53 | 71 | 36 | ||
乙基麦芽酚 | 141 | 126* | 75 | 22 |
71 | 75 | 37 |
“*”定量离子
结果与讨论
实验结果
由表3可知，采用固相萃取结合液相色谱串联质谱法检测花生油中麦芽酚&乙基麦芽酚，麦芽酚&乙基麦芽酚基质加标回收率分别为89.3%和86.1%，变异系数分别小于4.0%和3.0%，能够满足检测标准要求。
表3.麦芽酚&乙基麦芽酚回收率实验结果
物质名称 | 保留时间/min | 添加水平/mg/kg | 回收率 /% | CV /% |
麦芽酚 | 1.57 | 4.55 | 89.3 | 3.6 |
乙基麦芽酚 | 3.27 | 5.04 | 86.1 | 2.2 |
图1. 麦芽酚&乙基麦芽酚混标溶液的LC-MS/MS色谱图
（混标浓度：麦芽酚&乙基麦芽酚分别为1.820 mg/L和2.015 mg/L）
图2. 花生油空白LC-MS/MS色谱图
图3. 花生油基质加标LC-MS/MS色谱图
（加标浓度：麦芽酚&乙基麦芽酚分别为4.55 mg/kg和5.04 mg/kg）
结论
本实验建立了花生油中麦芽酚&乙基麦芽酚的检测方法，并结合高效液相色谱串联质谱对花生油中麦芽酚&乙基麦芽酚的含量进行测定。加标量分别为4.55 mg/kg和5.04 mg/kg时，回收率分别为89.3%和86.1%，变异系数分别小于4.0%和3.0%，符合实验要求。说明Cleanert® S C18小柱可以用于检测油中的麦芽酚&乙基麦芽酚。
附：相关产品
产品名称 | 规格描述 | 包装数量 | 订货号 |
Venusil® ASB C8 | 5 µm，150 Å，2.1 × 50 mm | 1支 | VS850502-0 |
Cleanert® S C18 | 500 mg/6 mL | 30支/包 | S185006 |
Qdaura®卓睿全自动固相萃取系统 | 4通道 | 1台 | SPE-40 |
15位氮吹仪 | 15位 | 1台 | NV15-G |
直联式保护柱芯 | 5 µm，150 Å；2.1 × 10 mm | 4支/包 | VS850102-0S |
1.5 mL样品瓶 | 短螺纹透明带书写处 32 × 11.6 mm | 100/pk | 1109-0519 |
1.5 mL样品瓶盖 | 9 mm中心孔蓝盖，红色橡胶/米色PTFE隔垫 45°Shore A; 1.0 mm | 100/pk | 0915-1819 |
Nylon针式过滤器 | 单膜，13 mm，0.22 µm | 200/pk | AS021320 |
一次性注射器 | 2 mL无针头 | 100支/包 | LZSQ-2ML |
应用编号：AF10138
