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婴幼儿奶粉中5种核苷酸分析报告

应用简介

本实验采用高效液相色谱 (HPLC) 法结合紫外检测器,按照GB 5413.40-2016婴幼儿食品和乳制品中核苷酸的测定方法,使用Venusil® C18 Plus色谱柱 (5 µm,120Å;4.6 × 250 mm)对5种核苷酸混合标准溶液、某品牌婴幼儿奶粉供试品溶液进行分析测定。结果表明:在波长为254 nm,流动相为1000mL磷酸盐缓冲溶液中定量加2.5mL磷酸和40mL甲醇时, Venusil® C18 Plus色谱柱可将5种核苷酸完全分离,基质样品中五种核苷酸与杂质分离度大于1.5,五种核苷酸的回收率97%~109%,可用于婴幼儿奶粉中5种核苷酸的分析测定。

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前言

核苷酸是生命遗传物质DNA和RNA的基本组成单位,是体内合成核酸的前身物。婴幼儿正处在快速生长发育阶段,身体对核苷酸的需求量超过体内合成核苷酸的能力,但母乳可为婴幼儿提供所需核苷酸。而对于没有母乳喂养的婴幼儿,食用含足量核苷酸的配方奶粉,不仅可提高免疫力,也可保护婴幼儿肠胃健康。

表1. 5种核苷酸样品信息

样品名称

英文简称

结构式

分子式

分子量

CAS号

胞嘧啶核苷酸

CMP

C9H14N3O8P

323.2

63-37-6

次黄嘌呤核苷酸

IMP

C10H13N4O8P

348.21

131-99-7

腺嘌呤核苷酸

AMP

C10H14N5O7P

347.22

61-19-8

尿嘧啶核苷酸

UMP

C9H13N2O9P

324.18

58-97-9

鸟嘌呤核苷酸

GMP

C10H14N5O8P

363.22

85-32-5

实验部分

仪器、试剂与材料

主要仪器设备

高效液相色谱仪,紫外检测器;

试剂材料

屈臣氏水;甲醇为色谱纯;

磷酸二氢钾色谱纯;磷酸、四丁基硫酸氢铵为分析纯;

胞嘧啶核苷酸对照品、腺嘌呤核苷酸对照品、尿嘧啶核苷酸对照品、次黄嘌呤核苷酸对照品、鸟嘌呤核苷酸对照品:由某乳制品公司提供;

高效液相色谱柱:Venusil® C18 Plus; 5 μm,120 Å,4.6 × 250 mm;

样品制备

5种核苷酸混合标准溶液:分别称取核苷酸标准品CMP、AMP、UMP各10 mg、GMP、IMP各5 mg (精确至0.1 mg) ,用水溶解成并定容至100 mL,混匀,即得;

某品牌婴幼儿奶粉样品溶液:称取5.0 g奶粉样品,用20 mL热水 (50~60℃) 充分溶解试样,冷却至室温;用10%乙酸溶液调节pH至4.1,移至50 mL容量瓶中,定容,滤纸过滤,所得滤液用0.45 μm滤膜过滤,即得样品溶液。

色谱条件

色谱柱:Venusil® C18 Plus; 5 μm,120 Å,4.6 × 250 mm;

流动相:称取1.360g磷酸二氢钾,加0.4753 g四丁基硫酸氢铵至1000 mL容量瓶中,用水补齐至刻度,准确加2.5ml磷酸和40mL甲醇,混匀后超声10min。

(备注:由于流动相中含离子对试剂,色谱柱需要先用流动相平衡至少90min后,再运行4针标准品,系统才能稳定)

波  长:254 nm;

柱  温:30℃;

流  速:1.0 mL/min;

进样量:10 µL。

结果与讨论

本实验按照GB 5413.40-2016婴幼儿食品和乳品中核苷酸的测定中方法,使用Venusil® C18 Plus色谱柱对5种核苷酸混合标准溶液、婴幼儿奶粉样品溶液进行检测,由以下结果可知,婴幼儿奶粉样品中五种核苷酸与杂质的分离度大于1.5,回收率97%~109%,满足实验需求。

表2. 5种核苷酸实验数据

样品名称

化合物名称

保留时间/min

理论塔板数

分离度

拖尾因子

备注

5种核苷酸混标

CMP

3.660

15803

0.98

图1

AMP

5.608

16882

13.46

0.97

GMP

11.061

18806

21.99

0.96

UMP

21.226

21178

22.40

0.98

IMP

26.011

20584

7.30

0.99

图1.Venusil® C18 Plus色谱柱5种核苷酸混标高效液相色谱图

图2.Venusil® C18 Plus色谱柱婴幼儿奶粉样品溶液高效液相色谱图

表3. 某品牌婴幼儿奶粉5种核苷酸实验数据

化合物名称

保留时间/min

分离度

拖尾因子

备注

CMP

3.659

0.99

图2,图3

杂质1

4.342

5.73

-

AMP

5.605

8.48

0.94

杂质2

6.081

2.74

-

GMP

11.051

18.91

0.97

杂质3

19.841

20.47

-

UMP

21.223

2.57

0.95

IMP

26.015

7.30

0.99

图3.Venusil® C18 Plus色谱柱婴幼儿奶粉样品溶液高效液相色谱图(纵坐标局部放大图)

表4. 某品牌婴幼儿奶粉5种核苷酸加标实验结果

化合物名称

保留时间/min

加标浓度(ug/mL)

回收率(%)

备注

CMP

3.660

12.2

108.4

图4

AMP

5.605

7.6

101.8

GMP

11.050

9.2

97.7

UMP

21.213

14.8

106.3

IMP

26.028

11

101.9

图4.Venusil® C18 Plus色谱柱婴幼儿奶粉样品加标溶液高效液相色谱图

结论

本实验按照GB5413.40-2016婴幼儿食品和乳品中核苷酸的测定中方法,使用Venusil® C18 Plus色谱柱对5种核苷酸混合标准溶液、婴幼儿奶粉样品溶液进行检测,结果表明在上述实验条件下,Venusil® C18 Plus色谱柱可用于婴幼儿奶粉中5种核苷酸的分析检测。

附:相关产品

产品名称

规格描述

包装数量

订货号

Venusil® C18 Plus

5 μm,120Å;4.6 × 250mm

1支

VPS952505-A

1.5 mL样品瓶

短螺纹透明带书写处

32 × 11.6 mm

100/PK

1109-0519

1.5 mL样品瓶盖

9 mm中心孔蓝盖,红色橡胶/米色PTFE隔垫

45°Shore   A;1.0    mm

100/PK

0915-1819

微孔滤膜

单膜,13 mm,0.45 μm

100个/包

AS021345-T

一次性注射器

2 mL无针头

100支/包

LZSQ-2ML

应用编号:AF10154


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